[發明專利]富硒紅球藻粉的制備方法及應用

無效

• 申請號: 200910272877.5
• 申請日: 2009-11-20
• 公開（公告）號: CN101715986A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發明（設計）人: 胡章立;高彥東
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: A23L1/337
• 分類號: A23L1/337;A23L1/29;C12N15/01;C12R1/89
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種富硒紅球藻粉的制備方法，其步驟是：

A、篩選硒耐受性強、硒蛋白和蝦青素含量高、生長快速的雨生紅球藻新品系：藻種在紅球藻培養基中生長，利用理化誘變和分子生物學育種技術，篩選出對無機硒耐受性強、硒蛋白和蝦青素含量高、生長快速的雨生紅球藻新品系；

(1)紫外線誘變為物理誘變劑之一，根據波長將紫外線分為UVA、UVB、UVC三種，其波長分別為320-400nm、280-320nm、100-280nm，對誘變有效的范圍是200-300nm，紫外線的作用是使DNA雙鏈之間或同一條鏈上的兩個相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，阻礙雙鏈的分開、復制和堿基的配對，引起突變；

經紫外誘變處理后的藻株要暗處理后再進光照培養，將20W的紫外燈打開，預熱20分鐘，紫外燈發出的波長處于穩定后，分別取處于對數生長期藻液6mL，置于小培養皿內，在磁力攪拌下，在距離紫外燈30cm處進行照射，時間分別為3、4、5分鐘，各重復3次；取5mL紫外照射處理后的藻液接種到裝有20mL培養液的50mL小錐形瓶中，遮光3小時以避免光修復，再重新放回到光照培養箱中培養3天，血球計數法對藻細胞進行計數，選擇致死率在50％-80％的處理，進行雙層平板分離，挑取生長快、體積的克隆，接種于25mL小錐形瓶中培養，將正常生長狀態的克隆分別接種至250mL錐形瓶中繼續培養，每10天繼代培養一次，共4次，突變株表現特性穩定的克隆，并進行硒難受性、硒蛋白和蝦青素含量等特性檢測，篩選得到穩定的突變株系；

(2)化學誘變方法：采用與誘變對象的化學誘變劑，化學誘變劑有堿基類似物、烷化劑、移碼突變劑、脫氨劑、羥化劑，烷化劑有一個或活性烷基，它們易于取代DNA分子中活潑的氫原子，直接與一個或堿基起烷化反應，改變DNA的分子結構，引起突變，1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍，一次處理使細胞發生一次或突變，使基因并發突變，在復制叉附近一個基因突變能誘發臨近位置的基因陸續連鎖突變；

取對數期藻液4mL，4000rpm，25℃，離心5min，棄上清液，加入pH值6.5的無菌磷酸鉀緩沖液5mL，洗滌三次，定容，加入NTG溶液，使終濃度分別為1.0g/L和2.0g/L，各3次重復，于25℃水浴中處理30分鐘，加入等量的硫代硫酸鈉終止反應；

處理過的藻液用無菌去離子水洗滌三次，去掉NTG溶液，最后接種到BBM培養基中，遮光處理12小時，再于光照培養箱中培養，稀釋后的藻液采用與紫外線誘變相同的方法進行雙層平板分離單克隆，進行硒難受性、硒蛋白和蝦青素含量等生物學特性檢測，篩選得到穩定的突變株系；

B、將篩選得到的目標藻株在溫度22-30℃、pH?6.5-7.0、光照1000-3000勒克斯，利用紅球藻培養基進行培養2-15天；

C、根據雨生紅球藻品種對硒耐受性的不同，采用接種培養基中直接加硒或當藻細胞達到生物量后加入無機硒的方法，其培養基中無機硒的濃度是低濃度10-30mg/L或高濃度200-500mg/L；

D、藻細胞連續培養2-15天后，通過過濾或離心的方法采收，并用清水或清洗液沖洗新鮮藻泥，洗去藻細胞表面的無機硒，利用烘干、噴霧干燥或冷凍干燥方法獲得富硒雨生紅球藻藻粉。

2.權利要求1所述的一種富硒雨生紅球藻藻粉在制備食品中的應用。

3.權利要求1所述的一種富硒雨生紅球藻藻粉在制備保健品中的應用。

4.權利要求1所述的一種富硒雨生紅球藻藻粉在制備藥品中的應用。