[發(fā)明專利]富硒紅球藻粉的制備方法及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910272877.5
• 申請日: 2009-11-20
• 公開（公告）號(hào): CN101715986A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡章立;高彥東
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號(hào): A23L1/337
• 分類號(hào): A23L1/337;A23L1/29;C12N15/01;C12R1/89
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種富硒紅球藻粉的制備方法，其步驟是：

A、篩選硒耐受性強(qiáng)、硒蛋白和蝦青素含量高、生長快速的雨生紅球藻新品系：藻種在紅球藻培養(yǎng)基中生長，利用理化誘變和分子生物學(xué)育種技術(shù)，篩選出對(duì)無機(jī)硒耐受性強(qiáng)、硒蛋白和蝦青素含量高、生長快速的雨生紅球藻新品系；

(1)紫外線誘變?yōu)槲锢碚T變劑之一，根據(jù)波長將紫外線分為UVA、UVB、UVC三種，其波長分別為320-400nm、280-320nm、100-280nm，對(duì)誘變有效的范圍是200-300nm，紫外線的作用是使DNA雙鏈之間或同一條鏈上的兩個(gè)相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，阻礙雙鏈的分開、復(fù)制和堿基的配對(duì)，引起突變；

經(jīng)紫外誘變處理后的藻株要暗處理后再進(jìn)光照培養(yǎng)，將20W的紫外燈打開，預(yù)熱20分鐘，紫外燈發(fā)出的波長處于穩(wěn)定后，分別取處于對(duì)數(shù)生長期藻液6mL，置于小培養(yǎng)皿內(nèi)，在磁力攪拌下，在距離紫外燈30cm處進(jìn)行照射，時(shí)間分別為3、4、5分鐘，各重復(fù)3次；取5mL紫外照射處理后的藻液接種到裝有20mL培養(yǎng)液的50mL小錐形瓶中，遮光3小時(shí)以避免光修復(fù)，再重新放回到光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，血球計(jì)數(shù)法對(duì)藻細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，選擇致死率在50％-80％的處理，進(jìn)行雙層平板分離，挑取生長快、體積的克隆，接種于25mL小錐形瓶中培養(yǎng)，將正常生長狀態(tài)的克隆分別接種至250mL錐形瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，每10天繼代培養(yǎng)一次，共4次，突變株表現(xiàn)特性穩(wěn)定的克隆，并進(jìn)行硒難受性、硒蛋白和蝦青素含量等特性檢測，篩選得到穩(wěn)定的突變株系；

(2)化學(xué)誘變方法：采用與誘變對(duì)象的化學(xué)誘變劑，化學(xué)誘變劑有堿基類似物、烷化劑、移碼突變劑、脫氨劑、羥化劑，烷化劑有一個(gè)或活性烷基，它們易于取代DNA分子中活潑的氫原子，直接與一個(gè)或堿基起烷化反應(yīng)，改變DNA的分子結(jié)構(gòu)，引起突變，1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍，一次處理使細(xì)胞發(fā)生一次或突變，使基因并發(fā)突變，在復(fù)制叉附近一個(gè)基因突變能誘發(fā)臨近位置的基因陸續(xù)連鎖突變；

取對(duì)數(shù)期藻液4mL，4000rpm，25℃，離心5min，棄上清液，加入pH值6.5的無菌磷酸鉀緩沖液5mL，洗滌三次，定容，加入NTG溶液，使終濃度分別為1.0g/L和2.0g/L，各3次重復(fù)，于25℃水浴中處理30分鐘，加入等量的硫代硫酸鈉終止反應(yīng)；

處理過的藻液用無菌去離子水洗滌三次，去掉NTG溶液，最后接種到BBM培養(yǎng)基中，遮光處理12小時(shí)，再于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，稀釋后的藻液采用與紫外線誘變相同的方法進(jìn)行雙層平板分離單克隆，進(jìn)行硒難受性、硒蛋白和蝦青素含量等生物學(xué)特性檢測，篩選得到穩(wěn)定的突變株系；

B、將篩選得到的目標(biāo)藻株在溫度22-30℃、pH?6.5-7.0、光照1000-3000勒克斯，利用紅球藻培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)2-15天；

C、根據(jù)雨生紅球藻品種對(duì)硒耐受性的不同，采用接種培養(yǎng)基中直接加硒或當(dāng)藻細(xì)胞達(dá)到生物量后加入無機(jī)硒的方法，其培養(yǎng)基中無機(jī)硒的濃度是低濃度10-30mg/L或高濃度200-500mg/L；

D、藻細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)2-15天后，通過過濾或離心的方法采收，并用清水或清洗液沖洗新鮮藻泥，洗去藻細(xì)胞表面的無機(jī)硒，利用烘干、噴霧干燥或冷凍干燥方法獲得富硒雨生紅球藻藻粉。

2.權(quán)利要求1所述的一種富硒雨生紅球藻藻粉在制備食品中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述的一種富硒雨生紅球藻藻粉在制備保健品中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求1所述的一種富硒雨生紅球藻藻粉在制備藥品中的應(yīng)用。