[發明專利]無血清培養BHK21細胞的方法和制備疫苗的方法

有效

• 申請號: 200910265983.0
• 申請日: 2009-12-31
• 公開（公告）號: CN102115729A
• 公開（公告）日: 2011-07-06
• 發明（設計）人: 張韌;陳文慶;王建超
• 申請（專利權）人: 北京清大天一科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K39/205;A61K39/135;A61P31/14;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶

1.一種無血清培養BHK21細胞的方法，該方法包括將BHK21細胞接種到細胞培養基中培養，其特征在于，所述細胞培養基包括基本培養基，并且以所述培養基溶劑的體積為基準，所述培養基還包括100-200g/100L的大豆蛋白、100-200g/100L的豌豆蛋白、100-200g/100L的蠶豆蛋白、0-100g/100L的馬鈴薯蛋白、0-200g/100L的小麥麩蛋白和50-100g/100L的水稻蛋白。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，以所述培養基溶劑的體積為基準，所述培養基包括150-180g/100L的大豆蛋白、150-180g/100L的豌豆蛋白、150-180g/100L的蠶豆蛋白、50-80g/100L的馬鈴薯蛋白、150-180g/100L的小麥麩蛋白和50-80g/100L的水稻蛋白。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，以所述培養基溶劑的體積為基準，所述培養基包括170-180g/100L的大豆蛋白、170-180g/100L的豌豆蛋白、170-180g/100L的蠶豆蛋白、50-60g/100L的馬鈴薯蛋白、150-160g/100L的小麥麩蛋白、50-60g/100L的水稻蛋白。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的無血清動物細胞培養基干粉，其中，所述大豆蛋白、豌豆蛋白、蠶豆蛋白、馬鈴薯蛋白、小麥麩蛋白和水稻蛋白通過以下方法制備：

a)粉碎大豆、豌豆、蠶豆、馬鈴薯、小麥麩或水稻植物原料至直徑為0.1-3mm³的顆粒；

b)在酶解時間為0.5-10h、酶解PH值為5-9、酶解溫度為45℃-60℃、酶量為2-5重量％的條件下酶解步驟a)所得的顆粒；其中，所述酶選自胰蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶中的一種或幾種，所述酶的酶活≥1×10⁵單位/克；

c)在80-100℃保持5-20min以終止步驟b)所述的酶解；

d)將步驟c)所得的酶解產物在3000-8000rpm下離心5-20min，收集上清液；

e)將步驟d)所得上清液用中空纖維過濾器超濾，所述過濾器所用膜的透過分子量為10000-20000道爾頓；

f)收集步驟e)所得超濾液，真空冷凍干燥，獲得相應植物蛋白。

5.根據權利要求4所述的無血清動物細胞培養基干粉，其中，所述大豆蛋白、豌豆蛋白、蠶豆蛋白、馬鈴薯蛋白、小麥麩蛋白和水稻蛋白通過以下方法制備：

a)粉碎大豆、豌豆、蠶豆、馬鈴薯、小麥麩或水稻植物原料至直徑為0.1-1mm³的顆粒；

b)在酶解時間為2-10h、酶解PH值為5-8、酶解溫度為45℃-60℃、酶量為2-5重量％的條件下酶解步驟a)所得的顆粒；其中，所述酶選自胰蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶中的一種或幾種，所述酶的酶活≥1×10⁵單位/克；

c)在80-90℃保持5-10min以終止步驟b)所述的酶解；

d)將步驟c)所得的酶解產物在3000-5000rpm下離心15-20min，收集上清液；

e)將步驟d)所得上清液用中空纖維過濾器超濾，所述過濾器所用膜的透過分子量為10000-20000道爾頓；

f)收集步驟e)所得超濾液，真空冷凍干燥，獲得相應植物蛋白。

6.根據權利要求1-3中任意一項所述的方法，其中，所述基本培養基選自BME細胞培養基、DMEM細胞培養基、DMEM/F12細胞培養基、Fischer′s細胞培養基、IMDM細胞培養基、199細胞培養基、MEM細胞培養基、F10細胞培養基、F12細胞培養基和1640細胞培養基中的一種或幾種。