[發明專利]一種發酵轉化正十七烷生產十七碳二元酸的方法

有效

• 申請號: 200910256586.7
• 申請日: 2009-12-30
• 公開（公告）號: CN102115765A
• 公開（公告）日: 2011-07-06
• 發明（設計）人: 曹務波;陳遠童;曹荀梅子
• 申請（專利權）人: 曹務波
• 主分類號: C12P7/44
• 分類號: C12P7/44;C12R1/74
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 辛向東

技術領域：

本發明涉及用生物合成技術生產長鏈二羧酸的方法，具體的說是關于微生物發酵轉化正烷烴生產長鏈α，ω-二羧酸的方法，特別是從正十七烷(nC₁₇)發酵轉化高產十七碳二元酸(DC₁₇)的方法。

技術背景：

長鏈二元酸是指碳鏈中含有10個以上碳原子的脂肪族二羧酸，是包括C₁₁-C₁₈的一系列二元酸產品，它們有著極其廣泛和重要的用途，是化學工業上制造高性能尼龍工程塑料、高級涂料、新興醫藥、高檔尼龍熱熔膠高溫介質、生物膜和農藥等十幾類產業，幾十種高檔產品的重要原材料。長鏈二元酸在自然界中不存在，化工方法只能合成十二碳二元酸(DC₁₂)，而且合成條件苛刻，成本高，環境污染嚴重。因此探索采用生物合成法生產長鏈二元酸就成為上世紀七十年代以來國內外科研工作者研究的熱點課題和化學工業界關注的的焦點。1970年，已故的中科院微生物所副所長方心芳院士，首次開創了石油工業微生物這一新領域，開創了微生物發酵生產長鏈二元酸的新來源。方院上的接班人陳遠童，從1986年以來，領導開展單一長鏈二元酸系列產品的應用開發研究，二十多年來，已取得7項專利授權證書，4項已形成工業化生產，其中，專利號為ZL89102548.0的發明專利公開的發酵生產DC₁₇，產酸水平達到133g/l，是國內外同類研究成果中產酸水平最高的，但從工業生產角度看，技術還不夠成熟，未能實現工業生產。而DC₁₇是化工上生產靈貓香香料的重要原料，自然界中沒有，至今國內外都沒有經濟可行的化工合成方法。本發明在該專利基礎上，有了新的發展和提高，可以進行工業化生產。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種新的微生物菌種，以及利用該微生物菌種同步發酵正烷烴生產C₁₀-C₁₈長鏈α，ω-二元酸的方法，尤其是可以實施工業化生產的同步發酵正十七烷烴，高產α，ω-十七碳二元酸的方法。

本發明所提供的微生物菌株為熱帶假絲酵母(Candida?tropicalis)ly-7，是以一株氧化正烷烴生產混合二羧酸的熱帶假絲酵母(參見《微生物學報》20(1)：88-93，1980)為出發菌株，經過亞硝酸2次處理和紫外線3次照射，以?一種氧化酶活力篩選指示培養基篩選，經過初篩和3次復篩培養出來，具有對nC₁₇ω-氧化酶活力提高30％，β-氧化酶活力降低25％，能夠高產DC₁₇的優良菌株。

具體篩選方法為：將出發菌株經過亞硝酸2次處理和紫外線3次照射，用生理鹽水分別稀釋為10^-1-10^-3，吸取0.1ml稀釋好的菌液，涂布于8巴林糖度的麥芽汁瓊脂培養平板上，每個稀釋度涂布5個平板，用黑紙包好，置于29℃的培養箱中培養40小時，統計致死率。以原出發菌株為對照，對誘變后的菌株進行發酵生產DC₁₇的試驗和產酸量檢測，所得優選菌株，即為熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)ly-7。

本發明熱帶假絲酵母(Candida?tropicalis)ly-7已于2009年10月14日在中國典型培養物保藏中心進行保藏，地址為中國武漢武漢大學，保藏號為：CCTCC?NO：M?209225。

熱帶假絲酵母(Candida?tropicalis)ly-7的生理特性如下：

糖類的發酵：葡萄糖+，半乳糖+，蔗糖+，麥芽糖+，乳糖-。

同化：葡萄糖+，半乳糖+，山梨糖-，蔗糖+，麥芽糖+，纖維二糖+，海藻糖+，乳糖-，密二糖-，棉子糖-，松三糖+，菊芋糖-，可溶性淀粉+，木糖+，L-阿戊糖+，D-阿戊糖-，核糖-，鼠李糖-，α-甲基葡萄糖苷，甘油+，乙醇+，赤蘚醇-，甘露醇+，肌醇-，核糠醇+，半乳糖醇-，葡萄糖醇+，檸檬酸鈉-，丁二酸鈉+，乳酸鈣-。

生長素的需要：生物素++，維生素B₁++，維生素B₂+，維生素B₆+，維生素B₁₂+，葉酸+，煙酸+，泛酸+，肌醇+，對氨基苯甲酸+。

其他：硝酸鹽-，凍化牛奶-，熊果酸分解-，凝固牛奶-，油脂酶-。

熱帶假絲酵母(Candida?tropicalis)ly-7形態特征：奶油白色，皺褶型，菌落為蛋糕狀和桃酥狀。

培養特征：