[發(fā)明專利]抗原檢測試劑盒和方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910253018.1
• 申請日: 2009-10-20
• 公開（公告）號: CN101988920A
• 公開（公告）日: 2011-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 安大魯;楊恩卿;韓基喆
• 申請（專利權(quán)）人: 韓國科學(xué)技術(shù)研究院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/68;G01N33/52;G01N21/64;C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權(quán)陸軍;黃可峻

與相關(guān)申請的交叉引用：

本申請要求了2009年7月30日向韓國知識產(chǎn)權(quán)局(Korean?IntellectualProperty?Office)提交的韓國專利申請?zhí)?0-2009-0070041的優(yōu)先權(quán)和利益，將其全部內(nèi)容引入本文作為參考。

發(fā)明背景：

(a)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供了一種用于檢測抗原的試劑盒，包含捕獲抗體、結(jié)合單鏈DNA寡核苷酸的檢測抗體、互補(bǔ)于該DNA寡核苷酸的單鏈RNA寡核苷酸以及RNA酶；和用上述試劑盒檢測抗原的方法。本發(fā)明采用單一分析手段和單一RNA酶，實(shí)現(xiàn)了多種生物材料的免疫測定。

(b)背景技術(shù)

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)是一種免疫測定，其利用材料與其相應(yīng)抗體的反應(yīng)來檢測所要分析的特定材料。在ELISA開發(fā)之前，進(jìn)行免疫測定的唯一選擇是放射免疫測定，使用放射性標(biāo)記的抗原或抗體的一種技術(shù)。由于放射性造成潛在的健康威脅，所以需要一種替代的免疫測定，其使用非放射性信號來取代放射性信號。響應(yīng)這種需求，已經(jīng)開發(fā)出ELISA，且其已經(jīng)成為最常用的免疫測定之一，高靈敏度地檢測各種靶物質(zhì)的存在。

通常，ELISA包括用酶標(biāo)記的抗體和與該酶反應(yīng)以產(chǎn)生信號的底物來檢測靶物質(zhì)的步驟。酶促反應(yīng)導(dǎo)致顏色或熒光中的改變。由于ELISA對每種物質(zhì)應(yīng)單獨(dú)進(jìn)行，所以當(dāng)用于分析樣品中的超過一種物質(zhì)時(shí)，難于直接對比該樣品中共存的各種物質(zhì)的相對量。

ELISA和其他免疫測定的一個(gè)區(qū)別在于存在/不存在信號放大過程。大部分免疫測定不包括由酶引起的信號放大過程，且通常基于熒光信號。使用標(biāo)記于抗體上的熒光團(tuán)信號的免疫測定可簡便地用于進(jìn)行多重免疫測定，因?yàn)槊總€(gè)不同的熒光團(tuán)在不同的波長的發(fā)射，可分別用于多種物質(zhì)的分析。相比之下，基于酶的免疫測定，例如ELISA，利用由酶促反應(yīng)導(dǎo)致的吸光度或熒光的改變，需要不同的酶-抗體綴合物來進(jìn)行多重測定，并需要鑒定和使用多對酶-底物。因此，隨著樣品中分析物數(shù)量的增加，在技術(shù)上多重ELISA的完成變得比其他免疫測定更為困難。

最廣為人知的沒有酶促信號放大的多重免疫測定使用分別能夠特異結(jié)合相應(yīng)靶分子的不同種類的抗體，其固定于含有分別對應(yīng)于靶分子的不同熒光物質(zhì)的小球體相上。然后測量小球體的熒光信號，小球體中抗體結(jié)合至靶分子。但是，這種方法要求使用稱為流式細(xì)胞儀的昂貴儀器，且因此不如ELISA劃算，ELISA在許多實(shí)驗(yàn)室都可以方便地進(jìn)行。近來，一些在單個(gè)微量培養(yǎng)板上進(jìn)行的多重免疫測定被引入。例如在一種方法中，將抗-IgG固定在大約6微米的聚苯乙烯珠上并允許其結(jié)合捕獲抗體。為進(jìn)行多重測定，將不同種類分析物的檢測抗體與不同的熒光物質(zhì)一起加入。在另外一種叫做多重-FLISA(熒光聯(lián)接免疫吸附測定)的方法中，針對多種分析物的抗體連接在不同的QDots上，其分別在不同的波長發(fā)射。相同樣品中多種分析物的免疫測定可以通過熒光強(qiáng)度的分析同時(shí)進(jìn)行。這些方法的缺陷在于，其檢出限與ELISA相比不夠靈敏，因?yàn)樗鼈儧]有包含酶介導(dǎo)的信號放大過程。GenTel提供了一種多重免疫測定，其中多種抗體的每一種都直接結(jié)合在不同的熒光物質(zhì)上，并就熒光強(qiáng)度進(jìn)行測量。

采用酶促反應(yīng)的基于ELISA的多重免疫測定，包括一種QuansysBiosciences，Inc.提供的方法。在這種方法中，20nl的小點(diǎn)沉積在96孔板的孔底，每個(gè)點(diǎn)代表單個(gè)靶物質(zhì)的分析結(jié)果。由過氧化物酶-底物反應(yīng)所增加的發(fā)光量通過讀取發(fā)光圖來定量，從而提供了多重-ELISA形式。這種方法有其缺陷，它需要在板上預(yù)設(shè)點(diǎn)，且需要采集和分析圖象的昂貴儀器。另外一種基于ELISA多重免疫測定采用兩種分別連接堿性磷酸酶和過氧化物酶的抗體以測量相同樣品中兩種類型的分析物。酶提供了信號放大作用。盡管原則上這種方法被認(rèn)為是多重ELISA，但實(shí)際上當(dāng)樣品中所要分析的分析物數(shù)量增加到大于2時(shí)則變得更難進(jìn)行操作。此外，由于使用不同種類的酶，該方法并不劃算。因此，需要開發(fā)一種可以更方便進(jìn)行的新的多重免疫測定。

發(fā)明內(nèi)容：

發(fā)明人設(shè)計(jì)了一種可應(yīng)用于多重分析的免疫測定，其僅使用一種酶、抗體包被的支持物和常規(guī)ELISA中已經(jīng)使用的吸收或熒光測量儀器。

因此，一個(gè)實(shí)施方案提供了一種檢測抗原的試劑盒，其包括捕獲抗體、與單鏈DNA寡核苷酸綴合的檢測抗體、互補(bǔ)于該DNA寡核苷酸并用熒光物質(zhì)標(biāo)記的單鏈RNA寡核苷酸以及RNA酶。

另外一個(gè)實(shí)施方案提供了一種檢測抗原的方法，其使用捕獲抗體、與單鏈DNA寡核苷酸綴合的檢測抗體、互補(bǔ)于該DNA寡核苷酸并用熒光物質(zhì)標(biāo)記的單鏈RNA寡核苷酸以及RNA酶。