[發(fā)明專利]抗原檢測試劑盒和方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910253018.1
• 申請日: 2009-10-20
• 公開（公告）號: CN101988920A
• 公開（公告）日: 2011-03-23
• 發(fā)明（設計）人: 安大魯;楊恩卿;韓基喆
• 申請（專利權）人: 韓國科學技術研究院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/68;G01N33/52;G01N21/64;C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;黃可峻

1.一種抗原檢測試劑盒，其包括：

支持物；

固定在所述支持物上的捕獲抗體，其中該捕獲抗體能夠特異結合抗原；

檢測抗體-DNA綴合物(d-Ab-DNA綴合物)，其包括能夠在不同于捕獲抗體結合位點的抗原位點特異結合抗原的檢測抗體(d-Ab)，和單鏈DNA寡核苷酸；

熒光物質-RNA-熒光猝滅物質綴合物，其包括互補于所述DNA寡核苷酸的單鏈RNA寡核苷酸，與該單鏈RNA寡核苷酸的一個末端結合的熒光物質，和與該單鏈RNA寡核苷酸的另一個末端結合的熒光猝滅物質；和

RNA酶H。

2.權利要求1所述的抗原檢測試劑盒，其中所述抗原為選自以下的一種或多種：自身抗體、配體、天然提取物、肽、蛋白、金屬離子、合成藥物、天然藥物、代謝物、基因組、病毒和病毒產物以及細菌和細菌產物。

3.權利要求2所述的抗原檢測試劑盒，其中所述抗原為選自以下的兩種或更多種：自身抗體、配體、天然提取物、肽、蛋白、金屬離子、合成藥物、天然藥物、代謝物、基因組、病毒和病毒產物以及細菌和細菌產物，且試劑盒能夠同時檢測兩種或更多種類型的抗原。

4.權利要求3所述的抗原檢測試劑盒，其中檢測抗體-DNA綴合物具有與所檢測的抗原種類對應的彼此不同的DNA寡核苷酸，且DNA寡核苷酸彼此之間不互補。

5.權利要求1至4中任一項所述的抗原檢測試劑盒，其中檢測抗體和DNA寡核苷酸通過一種或多種選自酰胺鍵、二硫鍵、酯鍵、醚鍵和硫醚鍵的化學鍵結合。

6.權利要求5所述的抗原檢測試劑盒，其中檢測抗體和DNA寡核苷酸通過一種或多種選自SMPH(琥珀酰亞胺基-6-[β-馬來酰亞胺基丙酰胺基]己酸酯)、SMPB(琥珀酰亞胺基-4-[p-馬來酰亞胺基苯基]丁酸酯)、磺基-LC-SPDP(磺基琥珀酰亞胺基-6-(3’-[2-吡啶基二硫代]-丙酰胺基)己酸酯)和SIAB(N-琥珀酰亞胺基(4-碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯)的交聯劑結合。

7.權利要求1至4中任意一項所述的抗原檢測試劑盒，其中熒光物質為選自以下的一種或多種：香豆素類，呫噸類，花菁類，氟硼熒類，Alexa?Fluor類以及DyLight?Fluor類熒光物質。

8.權利要求1至4中任意一項所述的抗原檢測試劑盒，其中熒光猝滅物質為選自以下的一種或多種：dabcyl類物質，QSY類物質，BHQ類物質以及FRET(熒光共振能量轉移)。

9.一種抗原檢測方法，包括如下步驟：

使樣品接觸能夠特異結合待檢測抗原的捕獲抗體，以形成抗原-抗體結合；

使檢測抗體-DNA寡核苷酸(d-Ab-DNA)綴合物接觸結合至捕獲抗體的抗原，其中檢測抗體-DNA寡核苷酸綴合物包括能夠在不同于捕獲抗體結合位點的抗原位點特異結合抗原的檢測抗體(d-Ab)，和結合至檢測抗體的單鏈DNA寡核苷酸，以在抗原與d-Ab-DNA綴合物之間形成結合；

使熒光物質-RNA-熒光猝滅物質(F-RNA-Q)綴合物與既結合捕獲抗體又結合d-Ab-DNA綴合物的抗原接觸，其中F-RNA-Q綴合物包含互補于DNA寡核苷酸的單鏈RNA寡核苷酸、在RNA寡核苷酸的一個末端的熒光物質和在RNA寡核苷酸的另一個末端的熒光猝滅物質，以通過DNA-RNA的雜交形成DNA-RNA雙鏈；

用降解DNA-RNA雙鏈中RNA的RNA酶處理獲得的DNA-RNA雙鏈，以從RNA釋放熒光物質，且產生熒光；以及

測量產生的熒光強度。

10.權利要求9所述的抗原檢測方法，其中所述抗原為選自以下的一種或多種：自身抗體、配體、天然提取物、肽、蛋白、金屬離子、合成藥物、天然藥物、代謝物、基因組、病毒和病毒產物以及細菌和細菌產物。

11.權利要求9所述的抗原檢測方法，其中所述抗原為選自以下的兩種或更多種：自身抗體、配體、天然提取物、肽、蛋白、金屬離子、合成藥物、天然藥物、代謝物、基因組、病毒和病毒產物以及細菌和細菌產物，且所述方法能夠用兩種或更多種RNA寡核苷酸同時檢測兩種或更多種類型的抗原，其中每種RNA寡核苷酸相應于抗原的種類結合至不同的熒光物質。