[發(fā)明專利]一種鐵離子固定化親和色譜整體柱的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910248846.6
• 申請(qǐng)日: 2009-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN102108095A
• 公開（公告）日: 2011-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗華;張麗媛;王暉;梁振;張玉奎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C07K1/22
• 分類號(hào): C07K1/22;B01J20/286
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳;周秀梅

1.一種鐵離子固定化親和色譜整體柱的制備方法，其特征在于：

首先在毛細(xì)管中以N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺為功能單體，乙叉二甲基丙烯酸乙酯為交聯(lián)劑，環(huán)己醇、十二醇和N，N-二甲基甲酰胺的混合物為致孔劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑聚合而得的多孔整體柱基質(zhì)；

整體柱基質(zhì)繼而通過表面修飾反應(yīng)，使其表面鍵合上含羧基的功能團(tuán)，以用于后續(xù)的鐵離子固定；最后通入含鐵離子的溶液，實(shí)現(xiàn)鐵離子的固定化，完成鐵離子固定化親和色譜整體柱的制備。

2.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：

功能單體、交聯(lián)劑和致孔劑三者之間的質(zhì)量比例范圍為2∶3∶5-2.2∶2.9∶4.9；

致孔劑中環(huán)己醇、十二醇和N，N-二甲基甲酰胺三者之間的質(zhì)量比例范圍為76∶9∶15-72∶8∶20；

聚合反應(yīng)過程為，將反應(yīng)液通入處理后的熔融石英毛細(xì)管中，并立即用硅橡膠封閉毛細(xì)管兩端，置于52-58℃水浴中反應(yīng)14-18h，完成基質(zhì)聚合反應(yīng)。

3.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：

引發(fā)劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑和致孔劑三者總質(zhì)量的0.5-1.0％。

4.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：

所述表面修飾反應(yīng)過程為，在填充了基質(zhì)材料的毛細(xì)管中通入0.02-0.2mol/L的N，N-二羧基甲基-L-賴氨酸溶液，溶液的pH值為8-10.0，在室溫下反應(yīng)0.5-2h，進(jìn)行基質(zhì)表面的化學(xué)修飾；整體柱基質(zhì)通過表面修飾反應(yīng)，使其表面鍵合上含羧基的功能團(tuán)，以用于后續(xù)的鐵離子固定。

5.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：

在整體柱基質(zhì)通過表面修飾反應(yīng)后，用甲酸體積分?jǐn)?shù)為0.05-0.2％的溶液沖洗基質(zhì)材料至流出液為酸性。

6.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述鐵離子的固定化過程為，在填充了基質(zhì)材料的毛細(xì)管中通入0.05-0.2mol/L的三價(jià)可溶性鐵鹽溶液，實(shí)現(xiàn)鐵離子的固定化；在室溫下，使溶液緩慢流過色譜柱，反應(yīng)時(shí)間0.5-2h。

7.按照權(quán)利要求1或6所述的制備方法，其特征在于：制備好的鐵離子固定化親和色譜整體柱用甲酸體積分?jǐn)?shù)為0.05-0.2％的溶液沖洗，去除游離的鐵離子。

8.按照權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于：可溶性鐵鹽為三氯化鐵、硝酸鐵、硫酸鐵或其他可溶于水的三價(jià)鐵鹽中的一種或多種。

9.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：制備得到的鐵離子固定化親和色譜整體柱可用于在線或離線的磷酸化肽段選擇性富集分離，使用后的鐵離子固定化親和色譜整體柱可通過重復(fù)權(quán)利要求6的鐵離子的固定化過程實(shí)現(xiàn)再生。