[發(fā)明專利]一種嚏根草配基空間異構(gòu)體化合物及其制備和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910248445.0
• 申請(qǐng)日: 2009-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN102101878A
• 公開（公告）日: 2011-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁鑫淼;劉艷芳;張秀莉;豐加濤;肖遠(yuǎn)勝;薛興亞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C07J19/00
• 分類號(hào): C07J19/00;A61K31/585;A61P35/00
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳;周秀梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及二烯內(nèi)酯類化合物，具體地說(shuō)是一種嚏根草配基空間異構(gòu)體新化合物及其制備方法，其是一種通過大孔樹脂處理和二維制備色譜分離技術(shù)從傳統(tǒng)中藥蟾皮中制備分離出來(lái)的新化合物。

背景技術(shù)

蟾蜍是中醫(yī)臨床應(yīng)用較早的藥物，在我國(guó)己有上千年的臨床應(yīng)用歷史。其藥用部位為：皮、蟾酥、干燥全體。蟾皮有清熱解毒、利水消脹之功效，辛、涼、微毒，主治癰疽、腫毒，我國(guó)民間多用來(lái)治療原發(fā)性肝癌、肺癌等，具有較好的臨床效果(代麗萍等.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007，42(8)：858-861)。

二烯內(nèi)酯類化合物是蟾皮中的主要的活性成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有強(qiáng)心、抗菌、抗腫瘤等作用(賈彩云等.中草藥，2005，36(2)：244；Enomoto?A，et?al.J?Nat?Prod，2004，67(12)：2070；Cunha?Filho?GA，et?al.Toxicon，2005，45(6)：777；Usanova?IV，et?al.Eksp?Klin?Farmakol，2002，65(4)：23)。

目前報(bào)道的該類化合物有250多種，但空間異構(gòu)體的報(bào)道極少。然而空間異構(gòu)體，尤其是手性異構(gòu)體在生物活性上可能有較大差異，是制藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于此，本發(fā)明人經(jīng)過深入研究，從中華大蟾蜍干燥皮中提取分離得到一種新的蟾蜍二烯內(nèi)酯類化合物，經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證明其具有較好的抑制腫瘤細(xì)胞的作用。

本發(fā)明提供了一種嚏根草配基空間異構(gòu)體新化合物，所述化合物具有如下所示三種結(jié)構(gòu)式之一，

化合物I

化合物II

化合物III

本發(fā)明提供了蟾蜍二烯內(nèi)酯提取物的提取方法：蟾皮用乙醇提取，回收乙醇后濃縮液上大孔樹脂，先用水及低濃度乙醇洗脫，再用高濃度乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑即得蟾蜍二烯內(nèi)酯類提取物，蟾蜍二烯內(nèi)酯提取物中蟾蜍二烯內(nèi)酯的重量百分含量為60％～90％。

其中所說(shuō)的低濃度乙醇是指5％～50％的乙醇，高濃度乙醇是指70％～100％的乙醇。

其中所說(shuō)的大孔樹脂可以選擇非極性或極性大孔樹脂，所說(shuō)的非極性大孔樹脂可以選擇AB-8，D-101，XAD-4，X-5，HPD-100；所說(shuō)的極性大孔樹脂可以選擇HPD-400，S-8，NAK-9。

本發(fā)明還提供了蟾蜍二烯內(nèi)酯類化合物的制備方法：取蟾蜍二烯內(nèi)酯提取物，采用二維HPLC制備色譜純化后可獲得高純度單體，第一維采用反相色譜柱，第二維采用環(huán)糊精色譜柱。

所述化合物具體制備方法為：

1)取蟾蜍二烯內(nèi)酯提取物，經(jīng)制備型HPLC分離，色譜條件為：反相Xterra?C18色譜柱，A：0.1％(v/v)甲酸水；B：0.1％(v/v)甲酸乙腈，梯度洗脫：5％B～95％B，60min。分離過程中采用紫外檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)300nm，按檢測(cè)過程中不同樣品峰的保留時(shí)間分別收集各餾分，共收集20個(gè)餾分；

2)取Fraction?5回收溶劑，經(jīng)HPLC分離，色譜條件為：環(huán)糊精色譜柱，A：正己烷；B：異丙醇，梯度洗脫：5％B～30％B，55min，收集各個(gè)色譜峰，分別回收溶劑，經(jīng)核磁實(shí)驗(yàn)確定，獲得含化合物I的餾分；

取Fraction?6回收溶劑，經(jīng)HPLC分離，色譜條件為：環(huán)糊精色譜柱，A：0.1％(v/v)甲酸水；B：0.1％(v/v)甲酸乙腈，梯度條件：95％B～60％B，40min，收集各個(gè)色譜峰，分別回收溶劑，經(jīng)核磁實(shí)驗(yàn)確定，獲得含化合物II的餾分；

取Fraction?10回收溶劑，經(jīng)HPLC分離，色譜條件為：環(huán)糊精色譜柱，A：水；B：甲醇，梯度洗脫：5％B～50％B，35min，收集各個(gè)色譜峰，分別回收溶劑，經(jīng)核磁實(shí)驗(yàn)確定，獲得含化合物III的餾分。

所述的化合物可在制備治療和預(yù)防實(shí)體瘤的藥物中的應(yīng)用，如：宮頸癌、乳腺癌等。

本發(fā)明提供了一種通過大孔樹脂和二維制備色譜分離技術(shù)從傳統(tǒng)中藥蟾皮中制備嚏根草配基空間異構(gòu)體新化合物的方法。經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證明其具有較好的抑制腫瘤細(xì)胞的作用。

具體實(shí)施方案

現(xiàn)結(jié)合實(shí)例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)例僅限于說(shuō)明本發(fā)明，而非對(duì)本發(fā)明的限定。

實(shí)施例1：蟾蜍二烯內(nèi)酯提取物的制備

取蟾皮5Kg用95％乙醇提取3次，用醇量為10倍，每次提取時(shí)間為120分鐘，合并濾液，濾液減壓濃縮至5L，上大孔樹脂，先用水洗脫，再用5％～50％乙醇洗脫，再用70％～100％的乙醇洗脫，收集后者，減壓回收溶劑，干燥得到蟾蜍二烯內(nèi)酯提取物62g。

實(shí)施例2：蟾蜍二烯內(nèi)酯餾分制備