[發(fā)明專利]含硫氨基酸的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910248427.2
• 申請日: 2009-12-15
• 公開（公告）號: CN101738440A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于淑新;馮思;韓晶;孫元社;唐濤;李彤
• 申請（專利權(quán)）人: 大連依利特分析儀器有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/36;G01N30/74
• 代理公司: 大連非凡專利事務(wù)所 21220
• 代理人: 閃紅霞

1.一種含硫氨基酸的檢測方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行：

a.將胱氨酸和蛋氨酸氧化，再通過酸解，制取對酸穩(wěn)定的磺基丙氨酸和蛋 氨酸砜；

b.將衍生試劑2，4-二硝基氟苯與磺基丙氨酸和蛋氨酸砜進(jìn)行衍生化反應(yīng)， 生成有紫外吸收的產(chǎn)物；

c.對衍生產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜分析；

所述c步驟的色譜流動相：流動相A，流動相B；流速：1.2mL/min；檢測波 長：360nm；所述流動相A是將相同體積的乙腈與水混合，超聲脫氣10～15min； 所述流動相B是取固體無水乙酸鈉4.1g加水950mL，用冰醋酸調(diào)pH至6.4～6.8，加 10mL?N，N-二甲基甲酰胺，加水定容至1000mL，搖勻后用0.45μm微孔濾膜過濾， 超聲脫氣10～15min；所述流動相梯度條件如下表：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含硫氨基酸的檢測方法，其特征在于所述a步驟是 取含蛋白7.5～25mg的樣品置容器中，加入過甲酸溶液0.3mL，冰水浴氧化反應(yīng) 16h；向氧化液中加入0.1mL偏重亞硫酸鈉溶液，充分搖勻后再直接加入6.8mol/L 鹽酸溶液2.5mL，容器封口并置烘箱110±3℃水解24h；將水解液放置室溫并打開 容器瓶口，將水解液氮氣吹干，用衍生緩沖溶液洗滌容器，洗滌液轉(zhuǎn)移至25mL 容量瓶，用衍生緩沖溶液定容，制取含磺基丙氨酸和蛋氨酸砜的樣品溶液；所 述過甲酸溶液是將濃度30％的過氧化氫與濃度88％的甲酸按體積比1∶9混合，于 室溫下放置1h，置冰水浴中冷卻30min而制成；所述偏重亞硫酸鈉溶液是將3.36g 偏重亞硫酸鈉加水定容至10mL；所述6.8mol/L鹽酸溶液是將純鹽酸28mL加水稀 釋至50mL；所述衍生緩沖溶液是取硼酸1.24g和硼砂7.63g，置500mL容量瓶中 加水定容并搖勻制成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含硫氨基酸的檢測方法，其特征在于所述b步驟是 將a步驟所得樣品溶液過濾并取已過濾的樣品液10mL于50mL暗色容量瓶中，加 入5mL衍生試劑，放入60℃水浴中，反應(yīng)60min后冷卻至室溫，用平衡緩沖溶液 定容；所述衍生試劑是濃度為1％的2，4-二硝基氟苯乙腈溶液；所述平衡緩沖溶 液是取磷酸二氫鉀0.91g和磷酸氫二鈉3.58g，置250mL容量瓶中加水定容并搖勻。