[發明專利]一種埃替菲巴肽的合成方法

無效

• 申請號: 200910247949.0
• 申請日: 2009-12-31
• 公開（公告）號: CN101759776A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發明（設計）人: 白俊才;劉亞東;張國慶;賈軍
• 申請（專利權）人: 上海昂博生物技術有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 彭茜茜;白益華

技術領域

本發明涉及一種埃替菲巴肽(Eptifibatide)合成方法。

背景技術

埃替菲巴肽(Eptifibatide)是人工合成的環狀七肽，含有血小板膜GP?II?b/III。受體特異識別的Lys-Glu-Asn序列(類似于纖維蛋白原)，抑制血小板膜GP?II?b/IIIa受體與纖維蛋白原的結合。可用于治療患有無Q波心肌梗死的患者，也可用于預防PT-CA(血管成形術)術后缺血性并發癥的發生。該藥有口服和注射兩種制劑。靜脈用藥5min后，血漿濃度達峰值。用藥4～6h后，血漿濃度達穩定值。當其靜脈推注在90～250ug.kg-1時，血漿濃度峰值與劑量成正相關。埃替巴肽的血漿濃度與其抗血小板聚集作用成正相關，它進入血液循環后，25％藥物與血漿蛋白相結合。埃替巴肽主要經腎臟排泄，其tl/2(半衰期)為1～1.5h。嚴重腎功能不全患者藥物清除速度減慢，老年人藥物清除速度略有減慢，血液透析可增加藥物清除。常見不良反應為出血，較稍微，大多數局限在血管穿刺處或靜脈補液處。其他不良反應有低血壓，但不嚴重。

埃替非巴肽具有以下的化學結構：

埃替非巴肽也可以用氨基酸名稱表示如下：

埃替菲巴肽的合成方法目前既有固相法，液相法，也有固液相集合的方法。如在1999IBC多肽技術會議上，曾報道將MPa-Har-Gly和Asp-Trp-Pro兩個片斷耦合反應形成6肽片斷，再和三苯甲基保護的Cys殘基耦合，去除Cys和Har殘基上的S保護基團，變形成了雙硫健。

美國專利No.101983報道了液相合成方法，通過耦合Har-Gly和Asp-Trp-Pro，再分別與Cys和MPa反應，經環化后得到eptifibatide。

這些合成方法盡管生產量大，但消耗時間長，步驟復雜，GMP生產的控制項目多，不易穩定，且生產的副產物多，雜質的去除要多次洗滌或其他手段純化，使得現有工藝的收率為25-30％，導致成本高；而且雜質也僅能控制在0.3-0.5％范圍。

綜上所述，本領域迫切需要一種可以提高埃替菲巴肽收率，提高純度，使得成本降低的埃替菲巴肽的合成路線。

發明內容

本發明的目的在于提供一種可以提高埃替菲巴肽收率，提高純度，使得成本降低的埃替菲巴肽的合成路線。

本發明提供一種埃替菲巴肽的合成方法，其包括如下步驟：

(1)將Fmoc?Rink?linker與取代度為0.8-1.2mmol/g的AM樹脂縮合；得到Fmoc-多肽樹脂；

(2)將步驟(1)的Fmoc-多肽樹脂和去保護劑混合，除去Fmoc保護基，得到去保護的多肽樹脂；

(3)在縮合劑的存在下，使Fmoc保護的氨基酸和步驟(2)的去保護的多肽樹脂進行縮合；

(4)重復步驟(2)-(3)，得到如式(I)所示的六肽樹脂；

Fmoc-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-樹脂????(I)

(5)所述式(I)的六肽樹脂與Mpa(Trt)-OH縮合，得到式(II)所示的七肽樹脂；

Fmoc-Mpa(Trt)-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-樹脂?(II)

(6)在切割劑的存在下，使式(II)七肽樹脂上的七肽和樹脂分離，得到如式III所示的埃替菲巴肽粗品；

Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂?(III)

(7)所述式(III)的埃替菲巴肽粗品進行氧化環化，得到如式(IV)所示的埃替菲巴肽

在本發明的一個具體實施方式中，步驟(1)采用取代度為0.8-1.0mmol/g的AM樹脂。

在本發明的一個具體實施方式中，步驟(2)中，所述去保護劑以其總體積計，其中含有3-20％哌啶和0.5-10％二環脒(DBU)；

所述的去保護劑中還含有任選的選自下述的一種或多種物質：0-10％1-羥基苯并三唑(HOBt)、0-10％3-羥基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮(HOOBT)。

在本發明的一個具體實施方式中，步驟(2)的去保護劑以其總體積計，含有10±1％哌啶，1±0.2％二環脒；3±1％1-羥基苯并三唑；余量的DMF。

在本發明的一個具體實施方式中，步驟(3)中，所述縮合劑為1-羥基苯并三唑(HOBt)、N，N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)或其組合；