[發(fā)明專利]一種埃替菲巴肽的合成方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910247949.0
• 申請日: 2009-12-31
• 公開（公告）號: CN101759776A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 白俊才;劉亞東;張國慶;賈軍
• 申請（專利權(quán)）人: 上海昂博生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 彭茜茜;白益華

1.一種埃替菲巴肽的合成方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將Fmoc?Rink?linker與取代度為0.8-1.2mmol/g的AM樹脂縮合；得到Fmoc-多肽樹脂；

(2)將步驟(1)的Fmoc-多肽樹脂和去保護劑混合，除去Fmoc保護基，得到去保護的多肽樹脂；

(3)在縮合劑的存在下，使Fmoc保護的氨基酸和步驟(2)的去保護的多肽樹脂進行縮合；

(4)重復(fù)步驟(2)-(3)，得到如式(I)所示的六肽樹脂；

Fmoc-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-樹脂????(I)

(5)所述式(I)的六肽樹脂與Mpa(Trt)-OH縮合，得到式(II)所示的七肽樹脂；

Fmoc-Mpa(Trt)-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-樹脂?(II)

(6)在切割劑的存在下，使式(II)七肽樹脂上的七肽和樹脂分離，得到如式III所示的埃替菲巴肽粗品；

Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂??(III)

(7)所述式(III)的埃替菲巴肽粗品進行氧化環(huán)化，得到如式(IV)所示的埃替菲巴肽

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)采用取代度為0.8-1.0mmol/g的AM樹脂。

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述去保護劑以其總體積計，其中含有3-20％哌啶和0.5-10％二環(huán)脒(DBU)；

所述的去保護劑中還含有任選的選自下述的一種或多種物質(zhì)：0-10％1-羥基苯并三唑(HOBt)、0-10％3-羥基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮(HOOBT)。

4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)的去保護劑以其總體積計，含有10±1％哌啶，1±0.2％二環(huán)脒；3±1％1-羥基苯并三唑；余量的DMF。

5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述縮合劑為1-羥基苯并三唑(HOBt)、N，N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)或其組合；

6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述縮合劑選自1-羥基苯并三唑(HOBt)、N，N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)的組合，二者體積比例為(1～3)∶(3～10)。

7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，

Fmoc保護的氨基酸與縮合劑的摩爾比例為1∶1～3；或者

所述去保護的多肽樹脂和Fmoc保護的氨基酸的摩爾比例為1∶1～6，優(yōu)選1∶1～4.5。

8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，所述縮合步驟包括如下具體步驟：

(i)采用質(zhì)子活化劑洗滌式(I)所示的六肽樹脂；使得所述六肽樹脂的高精氨酸(Har)側(cè)鏈的胍基質(zhì)子化；

所述質(zhì)子活化劑為1-羥基苯并三唑(HOBt)、HOBt/DBU組合或苯磺酸；

(ii)使得所述式(I)的六肽樹脂與Mpa(Trt)-OH縮合，得到式(II)所示的七肽樹脂；

Fmoc-Mpa(Trt)-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-樹脂(II)。

9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，所述質(zhì)子活化劑為0.1-10％的1-羥基苯并三唑(HOBt)、0.1-5％DBU的DMF溶液，以所述質(zhì)子活化劑總體積計。

10.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(6)中，所述七肽和樹脂分離后，采用沉降劑進行沉降，得到如式III所示的埃替菲巴肽粗品；

Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂??(III)；

在一優(yōu)選例中，所述沉降劑為甲基叔丁醚(MTBE)或乙醚。