[發明專利]合成油和植物油基潤滑油產品的生物降解測試方法

無效

• 申請號: 200910245237.5
• 申請日: 2009-12-31
• 公開（公告）號: CN101748184A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 吳新世;張盈;孟祥云
• 申請（專利權）人: 天津南開大學蓖麻工程科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N21/31;G01N21/84
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

【技術領域】

本發明涉及生物降解潤滑油的評價方法，特別是一種合成油和植物油基潤滑油產品的生物降解測試方法。

【背景技術】

目前，世界上許多國家都已經開始了生物降解性潤滑油的研制和使用，因此同時也就會有相應的生物降解性能標準的建立，各國的潤滑油生物降解能力標準必須按照各國的社會現狀而定。測定潤滑油產品的生物降解方法主要有：一是通過測定氧的消耗和二氧化碳的生成，來評定生物降解率；二是通過測定潤滑油經過微生物培養過后的殘留量，來評定其生物降解率。這兩個方法是目前應用最多的試驗方法原理。根據這兩種方法，分別制定了應用比較廣泛的OECD?301B和CEC?L-33-A-93法。OECD?301B方法操作繁瑣，將會導致在實驗過程中的人為誤差影響大，影響試驗結果的重復性和再現性，但是實驗結果能切實反應試驗樣品的生物降解要求，最終產物為二氧化碳，對環境沒有二次污染，這就造成對試驗樣品要求的苛刻；CEC?L-33-A-93方法操作簡便，采用紅外光譜法測定潤滑油在經過培養過后的殘留量，該方法的可靠性、重復性和再現性相比較其他方法要好，因而得以普遍接受和使用。該方法通常適用于液壓油及低粘度潤滑油的生物降解評定試驗，對于其他粘度較高的潤滑油來說，由于在水質液相中的影響，其培養過程中的油水分散性能下降，后續培養液處理過程中油水難于分離等，都會導致試驗結果不穩定，誤差較大，有時可高達60％，甚至是完全失敗。

【發明內容】

本發明的目的在于提供一種合成油和植物油基潤滑油產品的生物降解測試方法，可以克服現有技術的缺陷。根據合成油和植物油基潤滑油配方的特定的組成部分能被微生物利用這一特性，通過采集獲得的活性污泥，經過馴化后接入到合成油和植物油基潤滑油降解培養基中，經過培養，測定降解培養基中的微生物菌液生物量和液相培養基中的潤滑油有機物殘留量作為評定合成油和植物油基潤滑油生物降解率的評定方法和標準。本發明操作簡便，數據再現性和重復性穩定可靠，成本低廉，適用于各種規格和粘度級別的可生物降解潤滑油。具有廣泛應用前景。

本發明提供的合成油和植物油基潤滑油產品的生物降解測試方法包括的步驟：

1)目的菌種的馴化：采集來自污水處理廠的活性污泥，經過24～48小時曝氣處理后，溶解于無菌水中，攪拌，得到菌懸液，吸取菌懸液于液體馴化培養基中，置于26～28℃恒溫箱中于180～200r/min下避光振蕩培養3～5天，待培養基變混濁后吸取該菌液反復接種于相同的馴化培養基中，每次接種量為5mL/100mL培養基。按照上述培養條件進行培養。馴化后的優勢菌為假單胞菌屬(Pseudomonas)、梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)、分枝桿菌屬(Mycobacterium)等好氣異養型細菌。

馴化培養基：KH₂PO₄?3.4g；Na₂HPO₄?1.5g；(NH₄)₂SO₄?4.0g；MgSO₄?0.7g；酵母粉0.01g；蓖麻基潤滑油2g；自來水1000mL；調節pH為7.2-7.6

2)種子培養生長曲線的確定：將馴化后生長比較旺盛的菌種，采用可見分光光度計在660nm波長下測定混合菌液OD(吸光度)值，繪制生物降解混合菌液的生長曲線，選擇對數生長期活躍的新生代菌液接種于降解培養基中的時間。

種子培養基：蛋白胨1.4質量％，NaCl?0.6質量％，葡萄糖0.3質量％，牛肉膏0.5質量％，KH₂PO₄0.5質量％，K₂HPO₄0.4質量％；培養溫度為37℃，培養基pH值為7.5。

3)潤滑油生物降解試驗：根據種子培養生長曲線選擇生長旺盛的菌液進行潤滑油生物降解試驗，從種子培養基中吸取混合菌液，接入到準備好的需要添加菌液的潤滑油生物降解培養基中，置于37℃，轉速為200r/min的恒溫振蕩器中，暗室內進行生物降解培養7天。

生物降解試驗包括：

(中性瓶)100mL礦物基營養液+1mL種子菌液；

(測試瓶)100mL礦物基營養液+1mL種子菌液+2g合成油和植物油基潤滑油；

(參比測試瓶)100mL礦物基營養液+1mL種子菌液+2g參比油；

(毒化瓶)100mL礦物基營養液+2g合成油植物油基潤滑油；

(參比毒化瓶)100mL礦物基營養液+2g參比油。