[發明專利]合成油和植物油基潤滑油產品的生物降解測試方法

無效

• 申請號: 200910245237.5
• 申請日: 2009-12-31
• 公開（公告）號: CN101748184A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 吳新世;張盈;孟祥云
• 申請（專利權）人: 天津南開大學蓖麻工程科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N21/31;G01N21/84
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.一種合成油和植物油基潤滑油產品的生物降解測試方法，其特征在于它包括的步驟：

1)采集來自污水處理廠的活性污泥，經過24-48小時曝氣處理后，溶解于無菌水中，攪拌，得到菌懸液，吸取該菌懸液于液體馴化培養基中，置于26～28℃恒溫箱中于180～200r/min下避光振蕩培養3～5天，待培養基變混濁后吸取該菌液反復接種于成分、濃度都相同的馴化培養基中，每次接種量為5mL/100mL培養基。仍按照上述培養條件進行培養。馴化后的優勢菌為假單胞菌屬(Pseudomonas)、梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)、分枝桿菌屬(Mycobacterium)等好氣異養型細菌，總活菌濃度為1.0×10⁵～1.0×10⁶個/mL。

2)種子培養生長曲線的確定：將馴化后生長比較旺盛的菌種于種子培養基中培養，培養溫度為37℃，采用可見分光光度計在660nm波長下測定混合菌液OD值，繪制生物降解混合菌液的生長曲線，選擇對數生長期活躍的新生代菌液接種于降解培養基中的時間；

3)根據種子培養生長曲線選擇生長旺盛的菌液進行潤滑油的生物降解試驗，從種子培養基中吸取混合菌液，接入到準備好的需要添加菌液的潤滑油生物降解培養基礦物營養液中，置于37℃，轉速為200r/min的恒溫振蕩器中，暗室內進行生物降解培養7天；

生物降解試驗包括：

中性瓶：100mL礦物基營養液+1mL種子菌液；

測試瓶：100mL礦物基營養液+1mL種子菌液+2g合成油和植物基潤滑油；

參比測試瓶：100mL礦物基營養液+1mL種子菌液+2g參比油；

毒化瓶：100mL礦物基營養液+2g合成油植物基潤滑油；

參比毒化瓶：100mL礦物基營養液+2g參比油；

4)接入混合菌液的生物培養基，在經過7天培養后，用1％的鹽酸水溶液和20gNaCl溶解，采用超聲波細胞破碎儀將培養基中的微生物細胞壁破碎；對預處理后的樣品分別進行TC(總碳)和IC(無機碳)的測定，依據TOC(總有機碳)計算公式(TOC＝TC-IC)求得TOC值。根據培養前后TOC值的變化情況，求得待測樣品和參比樣品的TOC降解率，分析樣品的生物可降解性。

5)、生物降解率測定：

用顯微鏡觀察水質潤滑油生物降解培養基中的微生物菌群生物量變化率，可作為評定其潤滑油被微生物利用的一個定性指標；

采用總有機碳分析方法，檢測水質培養基中的有機物變化率作為其生物降解的定量指標，計算公式如下：

P：毒化瓶中殘余油含量，％(平均值)

T：測試瓶中殘余油含量，％(平均值)。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的馴化培養基為：KH₂PO₄?3.4g；Na₂HPO₄?1.5g；(NH₄)₂SO₄?4.0g；MgSO₄?0.7g；酵母粉0.01g；蓖麻基潤滑油2g；自來水1000mL；pH為7.2-7.6。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的種子培養基為：蛋白胨1.4％，NaCl?0.6％，葡萄糖0.3％，牛肉膏0.5％，KH₂PO₄0.5％，K₂HPO₄0.4％；pH值為7.5。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的參比油為降解率達到96％的蓖麻油。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的生物降解培養基礦物營養液為KH₂PO₄?3.4g；Na₂HPO₄?1.5g；(NH₄)₂SO₄?4.0g；MgSO₄?0.7g；酵母粉0.01g；自來水1000mL調節pH為7.2-7.6。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的超聲波破碎條件采用間歇的方式：200W，2min，工作2s，停止1s，該步驟結束后，超聲波可使容器中的物質變熱，此時的溫度要保持在20～25℃的范圍內。