[發明專利]檢測待測水稻是否為科豐6號轉基因水稻的方法及其專用試劑盒

有效

• 申請號: 200910241993.0
• 申請日: 2009-12-18
• 公開（公告）號: CN101724699A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 張琰;黃新;朱水芳
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種檢測待測水稻是否為科豐6號轉基因水稻的方法及其專用試劑 盒。

背景技術

水稻是我國乃至全世界最重要的糧食作物之一，是世界上食用人口最多、歷史 最悠久的農作物。隨著生物技術的發展，轉基因技術正廣泛地應用于農作物品質改 良，已有多個轉基因水稻品系進行了環境釋放，申請商業化種植。科豐6號是轉雙 價抗蟲基因的轉基因水稻品系，所導入外源基因是Bt/CpTI。對轉基因植物進行品系 特異性檢測是對轉基因植物進行監督管理，保障其健康發展的重要技術基礎。轉基 因植物的外源插入片段的邊界序列是轉基因植物品系最重要的分子特征之一，它代 表了一個轉基因事件，一個品系。因此，檢測邊界序列即品系特異性是保障轉基因 安全的重要手段。

在轉基因生物安全受到越來越廣泛關注的當今社會，以生物技術為基礎的轉基 因檢測方法成了監管轉基因植物及食品的有效手段。實時熒光PCR(Real?time?PCR) 就是其中一個最常用最有效的方法。實時熒光PCR是在常規PCR基礎上加入熒光 標記探針，通過對PCR擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測實現對起 始模板定量及定性的分析，具有高特異性和高靈敏度的優點。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測待測水稻是否為科豐6號轉基因水稻(轉基因水 稻品系科豐6號)的方法及其專用試劑盒。

本發明提供了針對轉基因水稻品系科豐6號外源插入片段邊界序列的特異性引 物對和特異性探針。

所述特異性引物對是由序列表的序列1所示核苷酸和序列表的序列2所示核苷 酸組成的引物對。

特異性引物對：

上游引物：5’-ACGTAGTACGTACCGCCGTG-3’；序列表的序列1；

下游引物：5’-AGTGCAGATGCATGAATCGC-3’；序列表的序列2。

所述特異性探針可為TaqMan熒光探針，其核苷酸序列如序列表的序列3所示。 TaqMan熒光探針是一種寡核苷酸探針，報告熒光基團連接在探針的5’末端，淬滅 熒光基團連接在探針的3’末端。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性 的熒光探針，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時， Taq酶的5′-3′外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離， 從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子 形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

所述特異性探針的5’端標記有報告熒光基團，3’端標記有淬滅熒光基團。所述 報告熒光基團可為Fam(FAM)、Hex(HEX)、Tet(TET)、Joe(JOE)、Vic(VIC)、 Fite(FITE)、Cy3(CY3)或Cy5(CY5)。所述淬滅熒光基團可為Tamra(TAMRA)、 Rox(ROX)、Dabcy(DABCY)、Bhq1(BHQ1)或Bhq2(BHQ2)。特異性探針的核苷酸序 列：5’-CCGCGCGTTGTACTGAGAACCA-3’。所述特異性探針中，所述報告熒光基 團具體可為FAM熒光基團，所述淬滅熒光基團具體可為TAMRA熒光基團。

所述特異性引物對和/或所述特異性探針可應用于制備檢測待測水稻是否為轉 基因水稻品系科豐6號的試劑盒。

本發明同時保護一種檢測待測水稻是否為轉基因水稻品系科豐6號的試劑盒， 它包括所述特異性引物對和/或所述特異性探針。

所述試劑盒可應用于檢測待測水稻是否為轉基因水稻品系科豐6號。

本發明同時保護一種檢測待測水稻是否為轉基因水稻品系科豐6號的方法，是 以待測水稻的基因組DNA(總DNA)為模板，其特征在于：所述方法為用所述特 異性引物對和所述特異性探針進行實時熒光PCR檢測，確定待測水稻是否為轉基 因水稻品系科豐6號。

所述實時熒光PCR的PCR體系中，反應起始時，所述特異性引物對中的兩條 引物的濃度均可為0.2μmol/L，所述特異性探針的濃度可為0.1μmol/L。

所述實時熒光PCR的參數具體如下：50℃、2min；95℃、10min；95℃、15s， 60℃、1min，共40個循環。