[發明專利]一種微生物體內合成生物柴油的方法有效
| 申請號： | 200910241540.8 | 申請日： | 2009-11-25 |
| 公開（公告）號： | CN102071228A | 公開（公告）日： | 2011-05-25 |
| 發明（設計）人： | 呂雪峰;談曉明;段仰凱;蔡軻;朱至 | 申請（專利權）人： | 青島生物能源與過程研究所 |
| 主分類號： | C12P7/64 | 分類號： | C12P7/64;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 中科專利商標代理有限責任公司 11021 | 代理人： | 周長興 |
| 地址： | 266101 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 微生物 體內 合成 生物 柴油 方法 | ||
1.一種微生物體內合成生物柴油的方法，主要步驟為：
A)分別將不動桿菌蠟脂合成酶基因atfA、大腸桿菌脂酰輔酶A合成酶基因fadD、運動發酵單胞菌的丙酮酸脫羧酶基因pdc和乙醇脫氫酶基因adhB四個基因克隆到表達載體pET28b上，基因的兩端分別帶上NdeI和SpeI酶切位點，使上述四個基因都置于T7啟動子下游，由T7啟動子驅動表達；
B)通過SpeI和XbaI是同尾酶這一特點，將fadD基因插入到atfA基因片段后的SpeI位點得到質粒pXT9，將adhB基因插入到pdc基因片段后的SpeI位點得到質粒pXT10；再將pdc+adhB基因片度插入到atfA+fadD基因片段后的SpeI位點得到四個基因共表達的質粒pXT11；
C)將pXT11轉入到含有質粒pMSD8和pMSD15的大腸桿菌菌株得到大腸桿菌菌株XT31；
D)大腸桿菌菌株XT31經過IPTG和阿拉伯糖誘導產生生物柴油。
2.根據權利要求1所述微生物體內合成生物柴油的方法，其中，質粒pXT11上，atfA+fadD+pdc+adhB四個基因置于同一個T7啟動子的下游。
3.根據權利要求1所述微生物體內合成生物柴油的方法，其中，pMSD8和pMSD15兩個質粒是分別用于在大腸桿菌中過量表達乙酰輔酶A脫羧酶和硫酯酶的。
4.根據權利要求1所述的菌株，微生物體內合成生物柴油的方法，其中，產生的生物柴油為脂肪酸乙醇酯。
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