[發(fā)明專利]量子點(diǎn)熒光檢測酶活性的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910241266.4
• 申請日: 2009-11-27
• 公開（公告）號: CN102081040A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐芳瓊;任湘菱;楊柳青
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院理化技術(shù)研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 李柏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種量子點(diǎn)熒光檢測酶活性的方法。

背景技術(shù)

疾病早期快速檢測是許多重大疾病治療的關(guān)鍵，越早做出正確診斷越有利于疾病的治愈，因而發(fā)展早期檢測技術(shù)得到醫(yī)療界的普遍重視，進(jìn)而疾病檢測與監(jiān)測設(shè)備的家庭化成為醫(yī)藥發(fā)展的重要趨勢之一。在最新的早期診斷方法中，疾病標(biāo)志物的檢測是研究的熱點(diǎn)。以癌癥為例，從上世紀(jì)70年代末，Leon和Shapiro等首次證實(shí)腫瘤患者外周血循環(huán)中存在較高水平的DNA，且腫瘤轉(zhuǎn)移者其水平有進(jìn)一步增高趨勢以來，對癌癥標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)與檢測研究就有了長足的發(fā)展。目前已知的癌癥標(biāo)志物包括酶類、激素類、胚胎抗原、糖蛋白類抗原、蛋白類和基因標(biāo)志等等，其檢測手段也多種多樣。其中大部分研究是針對抗原、蛋白和基因類標(biāo)志物，而對于酶類這一重要標(biāo)志物的研究較少。

在癌癥標(biāo)志物中，各種酶蛋白其實(shí)占據(jù)了相當(dāng)重要的位置。以γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、乳酸脫氫酶(LDH)和堿性磷酸酶(ALP)活性檢測為例，這三種酶活性是血液化驗(yàn)中常有的指標(biāo)，具有很重要的臨床意義。比如：γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶的主要功能是參與體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝，且廣泛存在于人體各組織及器官中，以腎臟最為豐富，其次是胰肝等處。在膽汁淤積、炎癥等刺激下肝合成GGT增加，因此大多數(shù)肝膽疾病血清GGT活動(dòng)可有不同程度的增加。酒精性肝硬化及膽汁性肝硬化時(shí)，GGT明顯升高，可達(dá)正常的5-10倍。重型肝炎、晚期肝硬化，由于微粒體破壞、酶合成減少，GGT因而下降。各種原因引起的肝內(nèi)膽汁淤積、肝外膽道梗阻，GGT均明顯增高，可達(dá)400國際單位/升以上。肝癌時(shí)，由于癌細(xì)胞逆分化，類似胚胎期，此酶的生成增加，故血清GGT也呈中度或高度升高，臨床上也常把此酶作為觀察慢性肝炎伴肝硬化病人是否轉(zhuǎn)為肝癌的參考指標(biāo)。乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶，乳酸脫氫酶存在于機(jī)體所有組織細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，其中以腎臟含量較高。急性心肌梗塞發(fā)作后，早期血清中乳酸脫氫酶(LDH)活性升高；肝炎、急性肝細(xì)胞損傷及骨骼肌損傷時(shí)LDH都會(huì)升高。患活動(dòng)性風(fēng)濕性心臟病、急性病毒性心肌炎、溶血性貧血、腎壞死等病LDH也可升高。堿性磷酸酶是一種磷酸單酯酶，廣泛存在于人體組織和體液中，以骨、肝、乳腺、腸粘膜、腎，胎盤中。阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死，堿性磷酸酶明顯升高(肝細(xì)胞性黃疸則升高不明顯)；原發(fā)性和繼發(fā)性肝癌時(shí)堿性磷酸酶亦明顯升高，與癌組織中或癌腫周圍肝細(xì)胞合成堿性磷酸酶增加有關(guān)；其他腫瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨細(xì)胞瘤、骨肉瘤等，堿性磷酸酶增高時(shí)，提示可能有肝臟轉(zhuǎn)移。因此γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、乳酸脫氫酶(LDH)、堿性磷酸酶(ALP)的單一或聯(lián)合檢測可以實(shí)現(xiàn)癌癥的早期診斷(S.L.Liang，D.W.Chan，Clinica?Chimica?Acta?2007，381，93-97)。

由于酶反應(yīng)具有很強(qiáng)的專一性，酶蛋白往往較抗體、抗原或基因蛋白等更易于獲得且生物活性相對穩(wěn)定，酶反應(yīng)的底物一般都是小分子的有機(jī)物，容易獲得、價(jià)格便宜，所以構(gòu)建酶類標(biāo)志物的檢測體系將更為方便和價(jià)廉，易于促進(jìn)重大疾病早期診斷的普及化和家庭化，從而提高重大疾病的治愈率。