[發明專利]量子點熒光檢測酶活性的方法

有效

• 申請號: 200910241266.4
• 申請日: 2009-11-27
• 公開（公告）號: CN102081040A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發明（設計）人: 唐芳瓊;任湘菱;楊柳青
• 申請（專利權）人: 中國科學院理化技術研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 李柏

1.一種量子點熒光檢測酶活性的方法，其特征是，該方法包括以下步驟：

(1)配制量子點溶液：將水溶性量子點分散在磷酸鹽緩沖液中得到量子點溶液，量子點溶液中的水溶性量子點的摩爾濃度為1.3×10^-7～2.5×10^-3mol/L；

(2)配制反應底物溶液：將反應底物溶解在磷酸鹽緩沖液中得到反應底物溶液，反應底物溶液中的反應底物的摩爾濃度為6×10^-4～3×10^-1mol/L；

(3)配制輔酶溶液：將輔酶溶解在磷酸鹽緩沖液中得到輔酶溶液，輔酶溶液中的輔酶的摩爾濃度為0～5×10^-1mol/L；

(4)將步驟(1)、步驟(2)和步驟(3)配制的溶液混合，加入去離子水稀釋得到量子點熒光檢測酶活性的混合溶液，其中：量子點熒光檢測酶活性的混合溶液中水溶性量子點的摩爾濃度為2.1×10^-8～6.5×10^-4mol/L，反應底物的摩爾濃度為8×10^-5～6×10^-2mol/L，輔酶的摩爾濃度為0～8×10^-2mol/L；

(5)將待檢測的含有活性單位的酶溶液加入到步驟(4)得到的量子點熒光檢測酶活性的混合溶液中，充分混合均勻并在常溫下反應5～30分鐘得到混合溶液體系；采用熒光分光光度計檢測混合溶液體系，得到體系的熒光光譜，通過分析熒光光譜的熒光強度的變化測得待檢測酶活性的數據；

所述的反應底物選自γ-谷氨酰-3-羧基-對硝基苯胺、雙甘肽、γ-谷氨酰-α萘胺、γ一谷氨酰對硝基苯胺、乳酸正丁酯、L-乳酸、丙酮酸、磷酸對硝基苯、對硝基酚磷酸二鈉、磷酸苯二鈉、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、氯化乙酰膽堿所組成的組中的至少一種。

2.根據權利要求1所述的量子點熒光檢測酶活性的方法，其特征是：所述的磷酸鹽緩沖液的濃度為0.01摩爾/升，pH值為6.8。

3.根據權利要求1所述的量子點熒光檢測酶活性的方法，其特征是：所述的水溶性量子點的熒光發射波長位于400～700納米，量子產率大于20％。

4.根據權利要求1或3所述的量子點熒光檢測酶活性的方法，其特征是：所述的水溶性量子點是水溶性的CdTe量子點、CdTe/CdS量子點、CdTe/CdS/ZnS量子點、CdSe/ZnS量子點、ZnTe量子點或ZnSe量子點。

5.根據權利要求1所述的量子點熒光檢測酶活性的方法，其特征是：所述的輔酶是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化態或其還原態。

6.根據權利要求1所述的量子點熒光檢測酶活性的方法，其特征是：所述的待檢測酶是γ-谷氨酰轉移酶、乳酸脫氫酶、谷丙轉氨酶、膽堿酯酶或堿性磷酸酶。