[發(fā)明專利]一種手足口病單、雙價(jià)基因工程亞單位疫苗及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910236590.7
• 申請(qǐng)日: 2009-11-03
• 公開（公告）號(hào): CN101695569A
• 公開（公告）日: 2010-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙忠鵬;李敏;高嘯;羅德炎;李曉楠;劉鑫;邢麗;段越強(qiáng);楊鵬輝;王希良
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所
• 主分類號(hào): A61K39/125
• 分類號(hào): A61K39/125;A61K39/295;A61P31/14;C12N15/866;C12N7/04;C12R1/93
• 代理公司: 北京太兆天元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11108
• 代理人: 張韜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，涉及一種疫苗及其制備方法，特別涉及一種手足口病單、雙價(jià)基因工程亞單位疫苗及其制備方法。

技術(shù)背景

手足口病是由小RNA病毒科，腸道病毒屬病毒引起的，現(xiàn)已成為危害嬰幼兒健康和公共衛(wèi)生安全的重要傳染病。手足口病主要由腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒A16型(Cox.A16)引起。感染EV71和Cox.A16所引起的臨床癥狀難于區(qū)別。感染EV71常常并發(fā)嚴(yán)重的神經(jīng)炎癥，包括病毒性腦膜炎，腦炎，以及類似小兒麻痹的癱瘓，引起的肺水腫、肺出血經(jīng)常導(dǎo)致嬰幼兒的快速死亡。Cox.A16是引起心肌炎、心包炎、心肌病及其它嚴(yán)重疾病的重要病原。手足口病從感染到出現(xiàn)癥狀通常為3-6天。病人常在口中出現(xiàn)瘡，手掌、腳底出現(xiàn)皮膚紅疹。有些病例，主要是小于3歲的嬰幼兒，會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的并發(fā)癥，短期發(fā)燒后突然惡化，并快速死亡。

目前尚無(wú)有效的疫苗或藥物可防治手足口病。

自1974年首次報(bào)道EV71以來(lái)，EV71已在世界范圍內(nèi)引起多次爆發(fā)流行。近10年來(lái)，EV71病毒的流行在亞太地區(qū)猖獗，不僅發(fā)病人數(shù)多，而且死亡病例多。中國(guó)大陸地區(qū)于1981年由上海首次報(bào)道手足口病，此后，北京、山東、廣東等十幾個(gè)省份均有本病暴發(fā)流行的報(bào)道。2007年山東臨沂等地區(qū)發(fā)生手足口病流行，發(fā)病39606例，死亡14例。2008年，中國(guó)內(nèi)地共報(bào)告手足口病病例488955例，死亡126例。自2008年5月2日起，衛(wèi)生部將手足口病納入丙類法定傳染病管理。2009年手足口病疫情仍在中國(guó)大陸蔓延。

流行病學(xué)資料顯示，Cox.A16一般和EV71相伴流行，在流行過(guò)程中，考慮到Cox.A16多導(dǎo)致無(wú)癥狀感染，可能在流行中所占實(shí)際比例更高。2008年安徽阜陽(yáng)手足口病疫情發(fā)生后，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心在全國(guó)范圍內(nèi)病例標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果顯示，在582個(gè)手足口病病例陽(yáng)性標(biāo)本中，EV71占54.5％，Cox.A16占17.4％。

由EV71或Cox.A16引起的手足口病反復(fù)爆發(fā)可能是新的基因型在世界范圍內(nèi)傳播所致。對(duì)1970-2004年全球EV71分離株的分子流行病學(xué)分析顯示，EV71病毒分為3個(gè)基因型，即A，B，C型，8個(gè)基因亞型，即B1-B4和C1-C4亞型。對(duì)1983-2003年福島地區(qū)(Fukushima，Japan)Cox.A16分離株進(jìn)行遺傳重建顯示，Cox.A16分離株形成了3個(gè)不同的遺傳簇(A，B，C)。對(duì)1999-2004年中國(guó)深圳地區(qū)EV71和Cox.A16分離株進(jìn)行遺傳重建分析，表明EV71病毒主要流行C4亞型，Cox.A16病毒主要流行C型。進(jìn)幾年從中國(guó)大陸手足口病輕癥病例和重癥病例標(biāo)本中分離到的EV71病毒主要為C4亞型，Cox.A16病毒主要為C型。

EV71和Cox.A16病毒顆粒均為二十面體立體對(duì)稱的球形結(jié)構(gòu)，無(wú)包膜和突起。病毒粒子的衣殼由60個(gè)亞單位構(gòu)成，后者又是由4種衣殼蛋白(VP1-VP4)拼裝成的五聚體樣結(jié)構(gòu)。抗原決定簇基本上位于VP1-VP3上，而VP4包埋在病毒外殼的內(nèi)側(cè)。EV71和Cox.A16病毒基因組均為7400-7420個(gè)核苷酸的單股正鏈RNA，基因組中僅有一個(gè)開放閱讀框，編碼含約2190-2200個(gè)氨基酸的多聚蛋白，在其兩側(cè)為5’和3’-非編碼區(qū)(UTRs)，在其3’-UTRs區(qū)的末端含有一個(gè)長(zhǎng)度可變的poly-A。多聚蛋白可進(jìn)一步被水解成P1、P2、P3前體蛋白。P1前體蛋白編碼VP1、VP2、VP3、VP4病毒外殼蛋白；P2和P3前體蛋白編碼7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(2A-2C和3A-3D)。

在脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗和減毒活疫苗的啟發(fā)下，已經(jīng)有實(shí)驗(yàn)室開展手足口病滅活疫苗和減毒活疫苗的研究，取得了一些進(jìn)展，但距離臨床應(yīng)用仍有一段距離。曾有EV71福爾馬林滅活疫苗成功地控制EV71在保加利亞傳播的報(bào)道，但未見再次使用滅活疫苗的報(bào)道。中國(guó)臺(tái)灣何美鄉(xiāng)篩選了一株適于制備EV71滅活疫苗的病毒株YN3-4a，病毒產(chǎn)生量高、免疫原性強(qiáng)、交叉保護(hù)譜廣、子代病毒穩(wěn)定性高。在弱毒活疫苗的研制方面，中國(guó)臺(tái)灣余俊強(qiáng)使用EV71和Cox.A16弱毒株免疫小鼠獲得了對(duì)EV71強(qiáng)毒株的免疫保護(hù)，表明具有交叉保護(hù)功能。日本Minetaro?Arita采用反向遺傳學(xué)技術(shù)拯救弱毒株EV71(S1-3’)，免疫短尾猴后，神經(jīng)毒力降低，而具有廣譜的交叉保護(hù)活性。弱毒活疫苗，由于EV71和Cox.A16毒力決定基團(tuán)至今不清，一段時(shí)間內(nèi)難以研究成功。