[發明專利]基于新型DNA結合染料的實時熒光定量PCR檢測方法及其應用

無效

• 申請號: 200910236496.1
• 申請日: 2009-10-23
• 公開（公告）號: CN101696451A
• 公開（公告）日: 2010-04-21
• 發明（設計）人: 陳澤良;王玉飛;鐘志軍;徐杰;杜昕穎;汪舟佳;孫巖松;黃留玉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍疾病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.一種基于新型DNA結合染料的實時熒光定量PCR檢測方法，是以SYTO為熒光染料進行的實時熒光定量PCR檢測方法。

2.根據權利要求1所述的PCR檢測方法，其特征在于：所述SYTO熒光染料為SYT082。

3.根據權利要求1所述的PCR檢測方法，其特征在于：所述SYTO熒光染料的濃度為2μM。

4.根據權利要求1所述的PCR檢測方法，其特征在于：所述PCR反應體系為：10×PCR緩沖液2.5μl，dNTP(2.5mM)2μl，MgCl₂(25mM)2μl，上游引物(10μM)0.5μl，下游引物(10μM)0.5μl，rTaq酶(5U/μl)0.125μl，模板DNA(含1.0×10¹～10⁹拷貝)1μl，染料1μl，加水補齊至終體積25μl。

5.根據權利要求1至4任一項所述的PCR檢測方法，其特征在于：所述PCR反應條件為：預變性：94℃3min；擴增95℃30s，52℃30s，72℃30s，共40個循環；72℃10min。

6.根據權利要求4或5所述的PCR檢測方法，其特征在于：所述檢測方法包括以下步驟：

1)將SYTO為熒光染料加入權利要求4所述的PCR反應體系中；

2)按權利要求5所述的反應條件進行PCR反應。

7.一種實時熒光定量PCR檢測試劑盒，包括10×PCR緩沖液2.5μl、dNTP(2.5mM)2μl、MgCl₂(25mM)2μl、rTaq酶(5U/μl)0.125μl和熒光染料，其特征在于，所述熒光染料為SYTO熒光染料。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述SYTO熒光染料為SYTO82。

9.根據權利要求7或8所述的試劑盒，其特征在于：所述SYTO熒光染料的濃度為2μM。

10.SYTO熒光染料作為實時熒光定量PCR檢測熒光染料的用途。