[發(fā)明專利]一種重組腺病毒及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910235998.2
• 申請日: 2009-11-04
• 公開（公告）號(hào): CN101709292A
• 公開（公告）日: 2010-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯筱宇;李婷;金磊;杜彩萍;劉靜;王然
• 申請（專利權(quán)）人: 徐州醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/54;C12N15/861;A61K48/00;A61K38/45;A61P25/28;A61P25/08;A61P25/00
• 代理公司: 北京律誠同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 梁揮;葛濤年

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種重組腺病毒及其制備方法和應(yīng)用，特別涉及一種表達(dá)混合 系激酶3羧基末端肽段的重組腺病毒及其制備方法和在制備神經(jīng)保護(hù)藥物中 的應(yīng)用。

背景技術(shù)

載體是基因轉(zhuǎn)移的重要工具，外源基因要進(jìn)入細(xì)胞、逃避溶酶體的降解、 穿過核膜、逃避核酸內(nèi)切酶的降解，最終才能被表達(dá)，選擇理想的載體系統(tǒng)安 全、高效地將目的基因?qū)氚屑?xì)胞始終是基因治療的焦點(diǎn)。目前，應(yīng)用于基因 治療研究的基因轉(zhuǎn)移載體主要包括病毒載體和非病毒載體兩大類。應(yīng)用非病毒 載體的優(yōu)點(diǎn)是不存在野生型病毒的污染，相對安全，缺點(diǎn)是轉(zhuǎn)染效率較低；病 毒載體轉(zhuǎn)染效率高，但其在體內(nèi)應(yīng)用可能會(huì)出現(xiàn)一些毒副作用。所以應(yīng)根據(jù)靶 組織、防治病種的不同，選擇合適的轉(zhuǎn)移載體。腺病毒載體在基因治療臨床應(yīng) 用上的研究已得到廣泛而深入的開展。腺病毒是一種無包膜的DNA病毒，毒 粒直徑為60-90nm，由20面體的蛋白質(zhì)外殼和蛋白質(zhì)核酸復(fù)合核心組成。腺 病毒載體的優(yōu)點(diǎn)：(1)宿主范圍廣，可感染除淋巴細(xì)胞以外的幾乎所有細(xì)胞；(2) 感染效率高，可感染增殖期和靜止期的細(xì)胞；(3)安全性好，不整合到人的染 色體中，無插入致突變性；(4)能同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因，可用于聯(lián)合基因治療；(5) 在包裝細(xì)胞中能有效增殖，產(chǎn)生滴度高。腺病毒的這些生物學(xué)特性使其作為大 多數(shù)非遺傳性疾病基因治療的載體。

退行性腦病(老年癡呆、帕金森病)、腦卒中、癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)疾病不僅 嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，亦給其家庭和社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。開展腦病 神經(jīng)保護(hù)分子機(jī)制的研究，并在此基礎(chǔ)上篩選藥物作用的靶點(diǎn)、開發(fā)腦病治療 藥物具有重要的理論意義和臨床價(jià)值。

混合系激酶3(Mixed?lineage?kinase-3；MLK3)是MLK家族的成員^[1]。MLK 家族包括MLKs(1-4)、DLKs和ZAKs亞家族，在結(jié)構(gòu)上該家族成員與絲/蘇氨 酸蛋白激酶和酪氨酸蛋白激酶均有同源性，因而被命名為混合系激酶家族，但 實(shí)際上該家族成員只有絲/蘇氨酸蛋白激酶的活性^[2-3]。MLK家族是絲裂原活化 蛋白激酶(mitogen?activated?protein?kinases；MAPKs)的重要上游激酶之一。 MAPKs廣泛存在于各種細(xì)胞中，由ERKs(extracellular?signal?regulated kinases)、JNKs(c-Jun?N-terminal?kinases)和P38MAPKs亞家族組成。ERKs 在細(xì)胞生長和分化中起主要作用，而JNKs和P38MAPKs與多種原因誘發(fā)的細(xì) 胞凋亡密切相關(guān)^[4-5]。在所有的MLK家族成員中，只有MLK3可以同時(shí)活化 JNKs和P38MAPKs^[6-7]。MLK3通過磷酸化激活MKK4/7和MKK3/6，進(jìn)而分 別激活JNKs和P38MAPKs信號(hào)通路，最終引起細(xì)胞凋亡。MLK3在腦組織中 有較高的表達(dá)水平。本實(shí)驗(yàn)室及國外實(shí)驗(yàn)室的研究表明，MLK3-JNKs和 MLK3-P38MAPKs通路的活化參與了多種神經(jīng)退行性疾病，如老年癡呆、帕 金森病，并在缺血性腦中風(fēng)、癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)疾病中有重要作用。