[發明專利]一種重組腺病毒及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200910235998.2
• 申請日: 2009-11-04
• 公開（公告）號: CN101709292A
• 公開（公告）日: 2010-05-19
• 發明（設計）人: 侯筱宇;李婷;金磊;杜彩萍;劉靜;王然
• 申請（專利權）人: 徐州醫學院
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/54;C12N15/861;A61K48/00;A61K38/45;A61P25/28;A61P25/08;A61P25/00
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 梁揮;葛濤年

1.一種重組腺病毒，含有MLK3PRD?cDNA以及腺病毒載體，其中所述 重組腺病毒通過下述方法制備：

1)以SD雄性大鼠海馬為材料，提取大鼠海馬總RNA；

2)以合成的上游引物5’-ggtacctaatgtcagatgactcatcccc-3’，和下游引物 5’-gaattctcagggccctgcttctggt-3’進行RT-PCR擴增得到MLK3PRD?cDNA；

3)將獲得的MLK3PRD?cDNA定向克隆至質粒表達載體，獲得重組質粒；

4)將步驟3)獲得的重組質粒亞克隆至穿梭質粒載體，獲得包含MLK3PRD? cDNA的穿梭質粒載體；

5)將步驟4)獲得的穿梭質粒載體與腺病毒載體進行同源重組，獲得腺 病毒表達載體；

6)將步驟5)獲得的腺病毒表達載體線性化，轉染至腺病毒包裝細胞中， 擴增、純化后獲得所述重組腺病毒。

2.權利要求1所述的重組腺病毒，其特征在于，所述腺病毒載體為復制缺 陷型腺病毒載體。

3.權利要求1所述重組腺病毒的制備方法，包括如下步驟：

1)以SD雄性大鼠海馬為材料，提取大鼠海馬總RNA；

2)以合成的上游引物5’-ggtacctaatgtcagatgactcatcccc-3’，和下游引物 5’-gaattctcagggccctgcttctggt-3’進行RT-PCR擴增得到MLK3PRD?cDNA；

3)將獲得的MLK3PRD?cDNA定向克隆至質粒表達載體，獲得重組質粒；

4)將步驟3)獲得的重組質粒亞克隆至穿梭質粒載體，獲得包含MLK3PRD? cDNA的穿梭質粒載體；

5)將步驟4)獲得的穿梭質粒載體與復制缺陷型腺病毒載體進行同源重 組，獲得腺病毒表達載體；

6)將步驟5)獲得的腺病毒表達載體線性化，轉染至腺病毒包裝細胞中， 擴增、純化后獲得所述重組腺病毒。

4.權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述穿梭質粒載體為 pAdTrack-CMV。

5.權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述復制缺陷型腺病毒載 體為pAdEasy。

6.權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述腺病毒包裝細胞為 HEK293細胞。

7.權利要求1所述重組腺病毒或其表達產物在制備混合系激酶3抑制劑 方面的應用。

8.權利要求1所述重組腺病毒或其表達產物在制備神經保護藥物方面的 應用。

9.權利要求8所述的應用，其特征在于，所述神經保護藥物包括用于治 療包括退行性腦病、腦卒中以及癲癇的神經系統疾病的藥物。

10.根據權利要求7或8所述的應用，其特征在于，所述重組腺病毒被制 備成注射劑、噴涂劑、滴劑、噴霧劑或凍干粉。