[發(fā)明專利]菌核凈的多克隆抗體及其制備和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910232823.6
• 申請日: 2009-10-20
• 公開（公告）號: CN101691404A
• 公開（公告）日: 2010-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉媛;劉賢金;張存政;劉蓉蓉
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C07K14/765;C07K14/77;C07K1/113;G01N33/566;G01N33/531
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀(jì)昌

1.一種菌核凈的多克隆抗體，由半抗原與牛血清蛋白BSA偶聯(lián)獲得免疫抗原，免疫新西蘭大白兔后獲得，其特征在于：半抗原為菌核凈-2-戊二酸半酯。

2.如權(quán)利要求1所述菌核凈的多克隆抗體的制備，其特征在于：將菌核凈-2-戊二酸半酯用活性酯法與牛血清白蛋白偶聯(lián)，合成免疫抗原，再將免疫抗原用于免疫新西蘭大白兔，獲得菌核凈的多克隆抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述菌核凈的多克隆抗體的制備，其特征在于：活性酯法合成免疫抗原的步驟是：

稱取21mg菌核凈-2-戊二酸半酯溶于0.4mL二甲基甲酰胺中，再加入N-羥基琥珀酰亞胺7.17mg和環(huán)二己基碳酰亞胺13.76mg，充分混勻，室溫避光靜置過夜；

次日10000g離心10min，棄去沉淀，將上清液緩慢加入到3mL含有25mg牛血清白蛋白BSA的硼酸緩沖液中，硼酸緩沖液的pH為8.7，反應(yīng)液在室溫下繼續(xù)磁力攪拌4小時；

反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合液裝入透析袋中，在去離子水中4℃透析3天，每8小時換水一次，透析結(jié)束后獲得免疫抗原，分裝并保存于-20℃冰箱中備用。

4.如權(quán)利要求1所述菌核凈的多克隆抗體的應(yīng)用，其特征在于：將多克隆抗體采用間接競爭性ELISA法對樣品中菌核凈農(nóng)藥的殘留進(jìn)行檢測，檢測中使用的包被抗原為半抗原通過活性酯法與卵清蛋白OVA的偶聯(lián)物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述菌核凈的多克隆抗體的應(yīng)用，其特征在于：活性酯法合成包被抗原的步驟是：

稱取21mg菌核凈-2-戊二酸半酯溶于0.4mL二甲基甲酰胺中，再加入N-羥基琥珀酰亞胺7.17mg和環(huán)二己基碳酰亞胺13.76mg，充分混勻，室溫避光靜置過夜；

次日10000g離心10min，棄去沉淀，將上清液緩慢加入到3mL含有25mg卵清蛋白OVA的硼酸緩沖液中，硼酸緩沖液的pH為8.7，反應(yīng)液在室溫下繼續(xù)磁力攪拌4小時；

反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合液裝入透析袋中，在去離子水中4℃透析3天，每8小時換水一次，透析結(jié)束后獲得包被抗原，分裝并保存于-20℃冰箱中備用。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述菌核凈的多克隆抗體的應(yīng)用，其特征在于：多克隆抗體采用間接競爭性ELISA法對樣品中菌核凈農(nóng)藥的殘留進(jìn)行檢測是指：將被測植物樣品提取、凈化后制備得到ELISA待測液，然后利用間接競爭性ELISA法進(jìn)行檢測，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣品中的菌核凈含量。