[發(fā)明專利]一種基于金磁納米粒子的載藥平臺(tái)的構(gòu)建與應(yīng)用無效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200910232340.6 | 申請(qǐng)日： | 2009-12-07 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN101716348A | 公開（公告）日： | 2010-06-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 胥傳來;徐乃豐;陳偉;徐麗廣;朱穎越 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A61K47/48 | 分類號(hào)： | A61K47/48;A61K47/34;A61K31/122;A61P35/00;G01N33/531;A61K49/00 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 32104 | 代理人： | 時(shí)旭丹;劉品超 |
| 地址： | 214122 江蘇省無錫*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 納米 粒子 平臺(tái) 構(gòu)建 應(yīng)用 | ||
1.一種基于金磁納米粒子的載藥平臺(tái)的構(gòu)建方法，其特征是包括磁性納米 粒子的合成，F(xiàn)e3O4-SiO2核殼結(jié)構(gòu)的合成，F(xiàn)e3O4-SiO2核殼結(jié)構(gòu)的表面氨基修飾， 表面修飾后質(zhì)子化及靜電吸附金納米粒子，偶聯(lián)姜黃素和偶聯(lián)帶巰基聚乙二醇 PEG-SH制得多功能納米平臺(tái)，細(xì)胞培養(yǎng)吸收并表征；步驟為：
(1)磁性納米粒子的合成：用共沉淀法合成具有超順磁性的磁性納米粒子；
①分別稱取Fe3+，F(xiàn)e2+溶于80mL超純水，F(xiàn)e3+和Fe2+的總濃度為0.08mol/L， Fe3+∶Fe2+摩爾比1-1.2∶2，80℃、400r/min攪拌反應(yīng)10min；
②逐滴加入5mL氨水，并維持pH?10.0，滴加完畢后反應(yīng)30min；
③超聲混勻，水洗2～3遍；
④磁分離干粉；
(2)Fe3O4-SiO2核殼結(jié)構(gòu)的合成：利用步驟(1)得到的磁性納米粒子，根 據(jù)反相微乳液法在油包水的環(huán)境里合成Fe3O4-SiO2核殼結(jié)構(gòu)；
①加曲拉通，正己醇各7mL混合超聲20min至無油絲狀液體；
②28mL環(huán)己烷超聲45min，倒入100mL三頸燒瓶中，400r/min攪拌30min；
③4mg磁性納米粒子MNP/2mLH2O分散于2mL氨水中，混合液逐滴加入 步驟②的三頸燒瓶中，滴加速度50μL/min，滴加完畢后繼續(xù)攪拌30min；
④加入3mL正硅酸四乙酯TEOS，攪拌24h；
⑤加8mL丙酮，停止攪拌，倒入燒杯中靜置60min，沉淀分層；
⑥4000r/min離心10min，沉淀加乙醇溶解，超聲10min，再離心，重復(fù)6～8 次；
⑦55℃真空干燥7小時(shí)；
⑧干燥器中冷卻，備用；
(3)Fe3O4-SiO2核殼結(jié)構(gòu)的表面氨基修飾：用步驟(2)所得到的Fe3O4-SiO2核殼結(jié)構(gòu)，將其外層的硅球表面氨基化；
①100mL具塞錐形瓶中加入15mL丙三醇和25mL甲醇，超聲混勻；
②加60mg?Fe3O4-SiO2繼續(xù)超聲分散；
③加200μL超純水，超聲使均勻分散；
④加入2mL?3-氨丙基三乙氧基硅烷APTS，60℃水浴磁力攪拌6h；
⑤反應(yīng)結(jié)束后，用無水乙醇洗滌2～3遍，真空干燥；
(4)表面修飾后質(zhì)子化及靜電吸附金納米粒子：表面氨基修飾后在pH?6.0 的磷酸鹽緩沖液中質(zhì)子化；所得產(chǎn)物靜電吸附金納米粒子；
①取上述氨基修飾的磁性微球30mg加入到4mL?0.01mol/L?pH6.0的磷酸緩 沖液PB中，氨基修飾的磁性微球表面帶氨基正離子；
②5min后加入4mL的0.3mmol/L金納米粒子液；
③靜電吸附20min后3000r/min離心，紫外表征，得靜電吸附金納米粒子的 載體；
(5)偶聯(lián)姜黃素和偶聯(lián)帶巰基聚乙二醇PEG-SH：先共軛偶聯(lián)姜黃素；再 偶聯(lián)PEG-SH，與金納米粒子形成穩(wěn)定的金硫鍵，制得金磁納米粒子的納米平臺(tái)；
共軛偶聯(lián)姜黃素和帶巰基聚乙二醇PEG-SH：
①將上述靜電吸附金納米粒子的載體以超純水配成濃度為6mg/mL的懸液 A，稱取姜黃素溶于二甲亞砜DMSO中得B，濃度2mg/mL；
②將A/B按2∶1體積比放在一起反應(yīng)15min后離心，濾餅加超純水恢復(fù)體 積，紫外表征；
③加入PEG-SH反應(yīng)20min，離心，濾餅加超純水恢復(fù)體積；
(6)細(xì)胞培養(yǎng)吸收并表征：將金磁納米粒子的載藥平臺(tái)運(yùn)載進(jìn)入細(xì)胞并以 多種檢測(cè)手段進(jìn)行表征：
磁共振顯像MRI表征細(xì)胞吞噬多功能納米平臺(tái)；
四甲基偶氮唑MTT表征細(xì)胞活力；
流式細(xì)胞儀FCM，激光共聚焦掃描顯微鏡CLSM表征分析腫瘤細(xì)胞早期凋 亡的特征；
細(xì)胞電鏡切片表征多功能納米平臺(tái)被細(xì)胞吞噬后在細(xì)胞內(nèi)位置。
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