[發(fā)明專利]半乳糖的測(cè)定方法與半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒--9046

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910231963.1
• 申請(qǐng)日: 2009-12-04
• 公開（公告）號(hào): CN102087274A
• 公開（公告）日: 2011-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/52
• 分類號(hào): G01N33/52;G01N21/31;G01N21/33;C12Q1/48;C12Q1/25;C12Q1/32
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)/食品檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及半乳糖診斷/測(cè)定方法及其試劑盒。?

【背景技術(shù)】

牛奶在營(yíng)養(yǎng)界素有“液體黃金”的美稱，我國(guó)早在1992年由七部位聯(lián)合提出：“一杯牛奶強(qiáng)壯一個(gè)民族”的口號(hào)。奶類除不含纖維素外，幾乎含有人體所需要的各種營(yíng)養(yǎng)素。牛奶中的乳糖進(jìn)入人體后，經(jīng)小腸乳糖酶作用分解成葡萄糖和半乳糖。半乳糖是嬰兒大腦發(fā)育的必需物質(zhì)，與嬰兒大腦的迅速成長(zhǎng)有密切關(guān)系。?

牛奶雖好但并不是所有的人都能享受，有些人由于乳糖酶的缺乏，人體不能很好的消化吸收牛奶中的營(yíng)養(yǎng)素，還會(huì)造成鈣、磷、鉀、鐵等元素的吸收障礙，影響嬰幼兒的體格和智力發(fā)育，在老年人中，乳糖酶缺乏是造成骨質(zhì)疏松的重要原因。中國(guó)成年人飲用牛乳后乳糖吸收不良的發(fā)病率高達(dá)86.7％，不耐受指數(shù)為0.9。?

為了避免不適當(dāng)飲奶對(duì)健康造成的損害，因此最好在飲奶前檢查自己是否耐受乳糖，在飲用牛奶后，測(cè)試尿液中半乳糖的濃度，這是目前國(guó)外最常用的一種方法，更為簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、可靠。?

【發(fā)明內(nèi)容】

[要解決的技術(shù)問題]?

本發(fā)明的目的是提供一種半乳糖的測(cè)定方法。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒。?

[技術(shù)方案]?

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。?

本發(fā)明的方法是一種采用酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)?聯(lián)法(Couple?Reaction)的聯(lián)用技術(shù)，利用測(cè)定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長(zhǎng)處的吸光度變化測(cè)定半乳糖的方法。?

本發(fā)明半乳糖測(cè)定方法的的技術(shù)原理是根據(jù)下述半乳糖激酶、去硫代生物素合成酶、丙酮酸脫氫酶的系列催化反應(yīng)完成：?

半乳糖+腺苷三磷酸????半乳糖激酶????腺苷二磷酸+半乳糖1-磷酸?

腺苷二磷酸+磷酸根+去硫代生物素????去硫代生物素合成酶

腺苷三磷酸+7，8-二氨基壬酸+二氧化碳?

二氧化碳+乙酰-輔酶A+還原型輔酶????丙酮酸脫氫酶????丙酮酸+?

輔酶A+輔酶?

本發(fā)明的方法利用半乳糖激酶(galactokinase；EC?2.7.1.6)酶(偶)聯(lián)去硫代生物素合成酶(dethiobiotin?synthase；EC?6.3.3.3)、丙酮酸脫氫酶(pyruvatedehydrogenase；EC?1.2.1.51)酶促反應(yīng)終點(diǎn)法。半乳糖激酶酶解半乳糖反應(yīng)產(chǎn)生腺苷二磷酸，再通過(偶)聯(lián)合去硫代生物素合成酶、丙酮酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度，這樣可以通過測(cè)量340nm處吸光度下降的程度，可以測(cè)算半乳糖的濃度大小。?

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。?

本發(fā)明涉及一種半乳糖的測(cè)定方法。該半乳糖測(cè)定方法的步驟如下：?

A、樣品準(zhǔn)備：?

A.1標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備?

將一定量的半乳糖溶于水或緩沖液中，再將半乳糖濃度調(diào)整到100微摩爾/升，得到的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)樣品；?

A.2待測(cè)樣品預(yù)處理?

待測(cè)液體樣品直接測(cè)試，無(wú)須預(yù)處理；將一定量的待測(cè)固體樣品像制備標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣溶于水或緩沖液中；?

A.3空白樣品?

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其半乳糖濃度為0微摩爾/升；?

B、試劑溶液的制備：?

分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、半乳糖激酶、去硫代生物素合成酶、丙酮酸脫氫酶、腺苷三磷酸、單價(jià)磷酸鹽(磷酸根)、去硫代生物素與乙酰-輔酶A，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-0.35mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L與1-100mmol/L；?

C、待測(cè)樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進(jìn)行混合，在溫度15-45℃下反應(yīng)5-60分鐘，在主波長(zhǎng)340nm與副波長(zhǎng)405nm(如果受儀器限制可以不設(shè)副波長(zhǎng))下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定其吸光度隨時(shí)間的變化；?