[發(fā)明專利]中藥復(fù)方大青葉制劑的制備方法、質(zhì)量控制方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910230003.3
• 申請(qǐng)日: 2009-11-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101708223A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭桂秋;車?yán)?/a>;翟勇;陳樹(shù)恩;李欽剛;肖金金;寇麗麗;王麗慶;王中成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東魯泰環(huán)中制藥有限公司
• 主分類號(hào): A61K36/708
• 分類號(hào): A61K36/708;A61P11/00;A61P31/16;A61P31/14;A61P31/20;G01N30/02;G01N30/90
• 代理公司: 青島發(fā)思特專利商標(biāo)代理有限公司 37212
• 代理人: 蔡紹強(qiáng)

1.一種中藥復(fù)方大青葉制劑的檢測(cè)方法，其特征是所述的檢測(cè)方法主要包括內(nèi)容物的鑒別和含有成分的含量測(cè)定：

A.內(nèi)容物的鑒別的步驟

(1)大青葉的鑒別

取樣量：口服液10ml；或相應(yīng)生藥量的顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑；

口服液直接用于乙酸乙酯或三氯甲烷提取；其他劑型先用水10ml溶解后再同法操作；

取口服液10ml，用乙酸乙酯或三氯甲烷提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯或三氯甲烷提取液，用1％氫氧化鈉溶液洗滌2次，每次10ml，乙酸乙酯或三氯甲烷液置水浴上蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴セ蛉燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液；另取靛玉紅對(duì)照品，加乙酸乙酯或三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；

照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法檢驗(yàn)，吸取供試品溶液5～10μl，對(duì)照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以5∶4∶1的甲苯-乙酸乙酯-丙酮的混合液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)；

(2)山銀花或金銀花的鑒別

取樣量：口服液10ml；或相應(yīng)生藥量的顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑；

口服液直接用于按下述步驟進(jìn)行；其他劑型先用水10ml溶解后，加鹽酸調(diào)PH值，再同法操作；

取口服液10ml，加鹽酸2～4滴，使溶液PH值為1～2，用乙酸乙酯或三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯或三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml，分次溶解，用氨試液調(diào)PH值為7.0～7.5，加于聚酰胺柱，濕法裝柱，柱長(zhǎng)20cm，內(nèi)徑15～20mm，用氨試液調(diào)PH值為7.0～7.5的水溶液40ml洗脫，洗脫液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，必要時(shí)濾過(guò)，作為供試品溶液；另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；

照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法檢驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以1∶4的冰醋酸-水溶液或20∶6∶0.8三氯甲烷-甲醇-甲酸溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

或者取口服液10ml，加于30～60目，內(nèi)徑0.9cm聚酰胺柱上，用水50ml洗脫，棄去洗脫液，再用50％乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；

照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI?B薄層色譜法檢驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各0.5～1μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以20∶6∶0.8的三氯甲烷-甲醇-甲酸為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；?

(3)大黃的鑒別

取樣量：口服液10ml；或相應(yīng)生藥量的顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑；

口服液直接用于按下述步驟進(jìn)行；其他劑型先用水10ml溶解后，再加鹽酸調(diào)PH值；

取口服液10ml，加鹽酸1ml，置水浴中加熱30min，冷卻后用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液；

另取大黃對(duì)照藥材0.5g，加甲醇10ml，浸漬1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加鹽酸1ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素、大黃酚對(duì)照品，加乙酸乙脂制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；

照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法檢驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的30～60℃石油醚-甲酸乙脂-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；

(4)羌活的鑒別

取樣量：口服液10ml；或相應(yīng)生藥量的顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑；

口服液直接用于按下述步驟進(jìn)行；其他劑型先用水10ml溶解后，再用乙酸乙酯提取；

取口服液10ml，用乙酸乙酯或60～90℃石油醚提取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯或60～90℃石油醚提取液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取羌活對(duì)照藥材1g，加乙醇30ml，浸漬1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；

照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法檢驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5～8μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以10∶2∶3的乙酸乙酯-甲醇-水的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

或2∶1∶1的正己烷-苯-乙酸乙酯混合溶劑為展開(kāi)劑；或4∶1的正己烷-乙酸乙酯混合溶劑為展開(kāi)劑；展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

B.對(duì)含有的成分按照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定的步驟

1、大黃中大黃素與大黃酚總含量的測(cè)定方法

(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；85∶15的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；理論板數(shù)按大黃素、大黃酚峰計(jì)算均不得低于4000；

(2)對(duì)照品溶液的制備

精密稱取大黃素、大黃酚對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1ml含大黃素30μg、含大黃酚50μg的混合對(duì)照品溶液，備用；

(3)供試品溶液的制備?

精密吸取本品5ml，加鹽酸1ml，氯仿30ml，加熱回流30min，放冷，分取氯仿層，水層用氯仿強(qiáng)力振搖提取3次，每次30ml，合并氯仿提取液，水浴蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相使溶解，定容至10ml量瓶中，搖勻，濾過(guò)，備用；

(4)測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；

本品每1ml含大黃以大黃素(C₁₅H₁₀O₅)與大黃酚(C₁₅H₁₀O₄)之和計(jì)，不得少于0.1mg；

2、綠原酸的含量測(cè)定方法

(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；15∶85的甲醇-0.4％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)324nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，不得低于3000；

(2)對(duì)照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的對(duì)照品溶液，10℃以下保存；

(3)供試品溶液的制備

精密吸取本品1ml，置50ml棕色量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用；

(4)測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得;

本品每1ml含綠原酸(C₁₆H₁₈O₉)不得少于0.6mg。

2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：所述的中藥復(fù)方大青葉制劑的制法包括主藥配制和制備相應(yīng)制劑兩步，

(1)主藥配制

主藥重量組分配比是，大青葉360～440份，山銀花或金銀花180～220g份，羌活90～110份，拳參90～110份，大黃90～110份；

以上諸味藥材，加常規(guī)量水煎煮兩次，每次1h；合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度1.08～1.32；加乙醇使含醇量達(dá)50～60％，靜置，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度1.17～1.43的清膏，備用；

(2)制備相應(yīng)制劑

①制備口服液

向上步清膏加2～3倍水，攪勻，冷藏≥12h，濾過(guò)，濾液加熱煮沸0.5h，待溫度降至60℃時(shí)，加入防腐劑，冷藏≥12h，濾過(guò)；添加矯味劑，攪勻，制得藥物原液，備用；

添加劑的重量配比是：主藥總量∶防腐劑∶矯味劑＝1∶0.003～0.004∶0.14～0.16；

嬌味劑中，蔗糖∶非營(yíng)養(yǎng)性或低熱值矯味劑＝1∶0.04～0.05，

非營(yíng)養(yǎng)性或低熱值矯味劑從木糖醇，赤蘚糖醇，甘草酸，甜蜜素或甜菊苷中選擇；

配量蔗糖加水煮沸制成糖漿，再加入非營(yíng)養(yǎng)性或低熱值矯味劑使溶解，與藥物原液合并，?攪勻；加水至總體積1000份，按藥品規(guī)格灌裝，滅菌，即得；

②制備顆粒劑

上步清膏≤100℃干燥并制成細(xì)粉，按制藥常規(guī)加適宜藥用輔料，混勻并制成顆粒，上述配量可制得顆粒1000份，按藥品規(guī)格包裝，密封，即得；

③制備片劑

上步清膏≤100℃干燥并制成細(xì)粉，按制藥常規(guī)加適宜藥用輔料，混勻并制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，上述配量可制得片劑1000片，按藥品規(guī)格包裝，密封，即得；

④制備膠囊劑

上步清膏≤100℃干燥并制成細(xì)粉，按制藥常規(guī)加適宜藥用輔料，混勻并制成顆粒，填充于空膠囊內(nèi)，上述配量可制得膠囊劑1000粒，按藥品規(guī)格包裝，密封，即得；

⑤制備丸劑

上步清膏≤100℃干燥并制成細(xì)粉，添加適宜藥用輔料，按制藥常規(guī)加水或蜂蜜和水為黏合劑混勻并制成球形或類球形丸劑，≤80℃干燥；包糖衣或薄膜衣，上述配量可制得丸劑1000粒，按藥品規(guī)格包裝，密封，即得。?