[發(fā)明專利]一種大豆縮氨酸的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910224026.3
• 申請日: 2009-11-30
• 公開（公告）號: CN101704877A
• 公開（公告）日: 2010-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林樹森;孫玉蘭;朱秀清;張智宇;任為聰;趙偉華
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱美佳娜生物工程有限責(zé)任公司
• 主分類號: C07K4/10
• 分類號: C07K4/10;C12P21/06;C07K1/34;A23L1/305;A61K38/03
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費(fèi)碧華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種大豆縮氨酸的制備方法，具體涉及一種通過復(fù)合酶水解法 制備低分子量的大豆縮氨酸的方法，屬于食品加工領(lǐng)域。

背景技術(shù)

縮氨酸是2到50個氨基酸連接的構(gòu)造物，它表現(xiàn)出不同于蛋白質(zhì)的活性和 機(jī)能。一般可定義為“蛋白質(zhì)的一種”或“蛋白質(zhì)的短片”，更確切的說是多 種氨基酸中給人體特定活力和技能的部分成分來組合的無毒合成物。主要應(yīng)用 作為醫(yī)藥品(如治療劑，臨床診斷等)和生活用品(如機(jī)能性食品及化妝品)， 目前生活用品方面的市場正在日益擴(kuò)大。

目前，大豆縮氨酸是國內(nèi)外大豆加工、食品、營養(yǎng)學(xué)和醫(yī)學(xué)界十分關(guān)注和 研究的重點(diǎn)、熱點(diǎn)。美國、日本等發(fā)達(dá)國家研究較早，國外目前已經(jīng)形成廣泛 的縮氨酸產(chǎn)品市場，市場潛力很大，產(chǎn)品主要有兩類：一類是縮氨酸藥品和試 劑，世界上已經(jīng)有100多種縮氨酸藥物上市，這類產(chǎn)品純度非常高，價格也非 常昂貴；另一類是以縮氨酸為功能因子的低抗原保健食品和含縮氨酸的普通食 品。目前國外縮氨酸食品已經(jīng)形成產(chǎn)業(yè)，許多著名的公司進(jìn)行了縮氨酸系列產(chǎn) 品開發(fā)，例如縮氨酸食品添加劑以及添加縮氨酸的配餐等，有飲料、兒童午餐、 老年人套餐、運(yùn)動食品、促鈣吸收食品和降壓食品等。

我國對縮氨酸的研究起步較晚，但前景十分看好，由于大豆縮氨酸所具有 的保健功能和生理活性，在功能食品中的應(yīng)用領(lǐng)域越來越廣。目前市場處于準(zhǔn) 入期，市場上還沒有充足的產(chǎn)品，競爭格局也不明顯，尤其是1000Da以下的縮 氨酸產(chǎn)品極少。

目前對大豆縮氨酸的提取生產(chǎn)、研究較多。其中大部分所采用的原料是以 脫脂豆粉、大豆分離蛋白或低溫脫脂豆粕為主，其中脫脂豆粉和低溫豆粕粗蛋 白含量不高，蛋白純度較低，但大豆分離蛋白含量大于90％，并且蛋白質(zhì)質(zhì)量 較好。采用技術(shù)為酶水解或微生物發(fā)酵，但是微生物發(fā)酵所應(yīng)用的菌種需要的 衛(wèi)生條件較高，并且菌種產(chǎn)生蛋白酶活力較低，因此應(yīng)用商業(yè)酶進(jìn)行酶解較為 便捷。酶解后離心滲透反滲透、噴霧干燥而成。成品多為復(fù)合肽，可作為加工 食品添加的中間產(chǎn)品使用。其中酶水解法可采用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、枯 草芽孢桿菌蛋白酶及堿性蛋白酶水解。然而目前的方法存在著酶種類繁多反應(yīng) 條件苛刻，只注重水解度的高低，分子量1000以內(nèi)的大豆肽的提取率偏低，并 且酶解大豆蛋白時，其內(nèi)部的疏水基團(tuán)被暴露在外面，產(chǎn)物具有苦味等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決大豆分離蛋白的酶法修飾中存在的產(chǎn)物的苦味去除和分子量1000 以內(nèi)大豆縮氨酸的富集問題，本發(fā)明的目的在于提供一種新的復(fù)合酶制備方法 來提高大豆縮氨酸的提取率和含量。

為了達(dá)到上述目的，本方法采用如下的技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種大豆縮氨酸及其制備方法，是以大豆分離蛋白為原料，采 用堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶復(fù)合協(xié)同水解技術(shù)將大豆蛋白進(jìn)行水解產(chǎn)生目標(biāo)大 豆縮氨酸。

本發(fā)明所述的大豆縮氨酸，其含有分子量小于1000Da的大豆多肽。

所述的大豆縮氨酸是采用如下方法制備得到的：

1)采用加熱的方法對大豆分離蛋白進(jìn)行一定程度的預(yù)處理；

2)加入堿性蛋白酶進(jìn)行水解；

3)將堿性蛋白酶水解底物滅酶后，采用風(fēng)味蛋白酶繼續(xù)水解；

4)得到的水解液經(jīng)離心后，依次通過截留分子量分別為3000Da和1000Da 的聚醚砜膜進(jìn)行超濾，即先流過3000Da膜，后流過1000Da膜，最終得到分子 量小于1000Da的多肽溶液。

其中，所述預(yù)處理是取大豆分離蛋白加入10-20倍水，配成5％-10％溶液， 75℃-90℃加熱10-20分鐘。通過預(yù)熱溫度和水解度關(guān)系實驗得到，在85℃時水 解度優(yōu)于其他溫度的處理，由于蛋白的二硫鍵不斷的打開，使得酶作用位點(diǎn)暴 露，使得水解度增高。在85℃預(yù)熱15分鐘可以提高水解度。在90℃以上時由 于溫度過高，使得部分蛋白質(zhì)變性，酶作用位點(diǎn)反而被破壞。

所述堿性蛋白酶水解的水解條件為pH8.5-9.5，加入酶的重量為底物重量的 3-7％，酶解溫度50-65℃，酶解時間3-6h；優(yōu)選為pH9.0，加入酶的重量為底物 重量的5％，酶解溫度55℃，酶解時間4h。

所述風(fēng)味蛋白酶的水解條件為pH5.0-8.0，加入酶的重量為底物重量的3-7％， 酶解溫度45℃-55℃，酶解時間3-12h；優(yōu)選為pH6.5，加入酶的重量為底物重 量的5％，酶解溫度50℃，酶解時間6h。