[發明專利]人乳腺癌高轉移細胞亞系及其建立方法

無效

• 申請號: 200910223844.1
• 申請日: 2009-11-24
• 公開（公告）號: CN102071168A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發明（設計）人: 閆明霞;姚明;劉蕾;趙方瑜;朱淼鑫;王曉敏;孔韓衛
• 申請（專利權）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A01K67/027;C12R1/91
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 陳學雯

1.一種人乳腺癌高轉移細胞亞系是MDA-MB-231sci，具有生物學和病理學特征，還具備特殊轉移表型。

2.根據權利要求1所述的人乳腺癌高轉移細胞亞系，其特征在于，所述生物學特征是，

MDA-MB-231sci細胞為典型的多邊形上皮樣細胞；

胞漿豐富，胞核大而圓，保持了MDA-MB-231細胞系的形態學特點；

貼壁生長，大小較一致，排列緊密，界線清楚。

3.根據權利要求1所述的人乳腺癌高轉移細胞亞系，其特征在于，所述病理學特征是所述轉移使用裸鼠，所述裸鼠體內轉移部位腫瘤細胞與皮下腫瘤的細胞結構相似，轉移時間縮短，轉移率高。

4.根據權利要求3所述的人乳腺癌高轉移細胞亞系，其特征在于，所述轉移時間縮短至26-42天。

5.根據權利要求1所述的人乳腺癌高轉移細胞亞系，其特征在于，所述裸鼠轉移率為100％。

6.一種根據權利要求1所述的人乳腺癌高轉移細胞亞系的建立方法，其特征在于，

(1)人乳腺癌原位移植瘤模型的建立：取裸小鼠5只，收集體外培養生長旺盛的連續傳代人乳腺癌細胞株MDA-MB-231，調整細胞濃度為每毫升1×10⁷個，每只小鼠取0.2ml接種于裸小鼠右背側近腋部皮下；

當移植瘤長至直徑15mm左右時，頸椎脫臼法處死小鼠，剝取出移植瘤，清除外周血塊及結締組織，用含抗菌素的生理鹽水沖洗，切取生長良好、淡紅色、魚肉狀的瘤組織，將其剪切成直徑約1.5mm的小塊，用20號套管針移植至另外裸小鼠右前側乳腺脂肪墊部位，建立乳腺癌原位移植瘤模型；

(2)原位移植肺靶向轉移模型的篩選：建立原位移植瘤模型后，待瘤徑長至1.5～2.0cm時手術切除腫瘤及相應乳腺，待動物處于瀕死狀態時犧牲小鼠進行系統解剖，取肉眼明顯可見的肺轉移灶移植至另外裸小鼠乳腺脂肪墊進行原位移植，按乳腺原位移植、手術切除腫瘤及相應乳腺、肺轉移灶、乳腺原位移植的體內篩選方式進行高轉移循環篩選；

原代10只裸小鼠，其他每代4～6只裸小鼠，循環篩選至肺轉移達100％，此時取腫瘤組織建立相應的高轉移細胞亞系；

(3)人乳腺癌肺靶向高轉移細胞系的建立及傳代：將荷瘤裸小鼠頸椎脫臼法處死，無菌條件下取出皮下移植瘤，剔除壞死組織、纖維包膜及血管；

用含雙抗的PBS洗2次，向組織滴1-2滴含10％小牛血清的DMEM培養液，用顯微剪刀和顯微鑷將其盡量剪成小塊；

用顯微鑷將剪切好的組織塊在6cm培養皿上均勻放置，每一小塊間距0.5cm左右；

然后在培養皿內注入適量培養液，放置在37℃、含5％CO₂的培養箱內。以后所建立的原代細胞用含10％小牛血清的DMEM培養液進行常規培養和傳代。

7.根據權利要求6所述的人乳腺癌高轉移細胞亞系的建立方法，其特征在于，所述步驟(2)中所述循環篩選至第四代時肺轉移達100％，同時伴部分動物腋下淋巴結轉移。