[發明專利]用金屬氧化物富集糖肽及同時富集糖肽和磷酸化肽的方法

有效

• 申請號: 200910220155.5
• 申請日: 2009-11-25
• 公開（公告）號: CN102070701A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發明（設計）人: 梁鑫淼;閆競宇;柯燕雄;李秀玲;張秀莉;薛興亞
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07K2/00
• 分類號: C07K2/00;C07K1/14;C07K1/16;C07K1/34
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳;周秀梅

1.用金屬氧化物富集糖肽及同時富集糖肽和磷酸化肽的方法，其特征在于：以金屬氧化物作為固相萃取材料，富集蛋白酶解物中的糖肽或同時富集磷酸化肽和糖肽。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述金屬氧化物為氧化鈦、氧化鋯、氧化鋁中的一種或多種復合金屬氧化物。

3.按照權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述金屬氧化物材料形態為納米材料、微球材料以及金屬氧化物涂覆或包覆的球形或無定形材料。

4.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集的過程為柱萃取，具體操作如下：

1)將金屬氧化物裝入萃取柱管中，將pH為5-8蛋白酶解物上樣到萃取柱中，蛋白酶解物與金屬氧化物材料的重量比例為1∶1～200；

2)分別用1～10倍柱體積的鹽溶液、1～10倍柱體積的含有有機酸的乙腈水溶液沖洗萃取柱，乙腈的體積濃度為0-95％；

3)采用1～10倍柱體積的含有有機酸的乙腈水溶液洗脫糖肽，乙腈的體積濃度為0-95％；

4)采用1～10倍的柱體積的0.5-25wt％氨水洗脫得到磷酸化肽。

5.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集的過程為離心或過濾，具體操作如下：

1)將金屬氧化物與pH為5-8的蛋白酶解物混合，蛋白酶解液中內含的蛋白酶解物與金屬氧化物材料的重量比例為1∶1～200，孵化1～180分鐘，離心或過濾分離，棄上層溶液，收集沉淀；

2)將2-100倍固體體積的鹽溶液、2-100倍固體體積的含有有機酸的乙腈水溶液分別與沉淀混合震蕩1～180分鐘，乙腈的體積濃度為0-95％，離心或過濾分離，棄上層溶液，收集沉淀；此過程重復1-10次；

3)將1-50倍固體體積的含有有機酸的乙腈水溶液與沉淀混合震蕩1～150分鐘，乙腈的體積濃度為0-95％，離心或過濾分離，收集上清液以及沉淀，上清液即為糖肽；

4)將0.5-25wt％氨水與沉淀混合震蕩1～180分鐘，離心或過濾分離，收集上清液，棄去沉淀，上清液即為磷酸化肽。

6.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集的過程采用金屬氧化物包覆磁珠進行，具體操作如下：

1)將pH為5-8磁珠與蛋白酶解物混合，蛋白酶解液中內含的蛋白酶解物與磁珠材料的重量比例為1∶1～200，孵化1～180分鐘，在磁場作用下分離磁珠和上清液，棄上層溶液，收集磁珠；

2)將2-100倍固體體積的鹽溶液、2-100倍固體體積的含有有機酸的乙腈水溶液分別與磁珠混合震蕩1～180分鐘，乙腈的體積濃度為0-95％，在磁場作用下分離磁珠和上清液，棄上層溶液，收集磁珠，此過程重復1-10次；

3)將1-50倍固體體積的含有有機酸的乙腈水溶液與磁珠混合震蕩1～180分鐘，乙腈的體積濃度為0-95％，在磁場作用下分離磁珠和上清液，收集上清液以及磁珠，上清液即為糖肽；

4)將1-50倍固體體積的0.5-25wt％氨水與磁珠混合震蕩1～180分鐘，在磁場作用下離心磁珠和上清液，收集上清液，磁珠可以再利用，清液即為磷酸化肽。

7.按照權利要求4、5或6所述的方法，其特征在于：所述鹽溶液為10～1000mmol/L氯化鈉、磷酸鹽、碳酸鹽中一種或多種；所述有機酸為甲酸、乙酸或三氟乙酸。

8.按照權利要求4、5或6所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中的有機酸溶液體積濃度為0～10％；所述步驟3)中的有機酸溶液體積濃度為0.01～20％。