[發明專利]一種微囊化細胞活性的檢測方法有效
| 申請號： | 200910219620.3 | 申請日： | 2009-11-04 |
| 公開（公告）號： | CN102053123A | 公開（公告）日： | 2011-05-11 |
| 發明（設計）人： | 馬小軍;肖靜;王為;于煒婷 | 申請（專利權）人： | 中國科學院大連化學物理研究所 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N1/28;G01N30/06;C12Q1/00 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 馬馳;周秀梅 |
| 地址： | 116023 *** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 微囊化 細胞 活性 檢測 方法 | ||
1.一種微囊化細胞活性的檢測方法，其特征在于：將待分析的微囊化細胞樣品機械破囊處理后，加入預熱的裂解液中孵育裂解蛋白后，上清液采用高效液相色譜法分離定量腺苷酸，計算能荷，以腺苷酸種類數量變化以及能荷變化作為評價微囊化細胞活性的指標。
2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：微囊化樣品采用的機械破囊方法是將樣品轉移至注射器中，反復抽吸研磨破囊。
3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：加入的裂解液組成是PH7.0-7.5，45-55mM?HEPES，10-80mAU/ml蛋白酶k。
4.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：孵育裂解蛋白的條件是30-80℃水浴孵育15-45分鐘，5分鐘間隔震蕩，再將反應體系轉移至30-80℃水浴繼續反應15-45分鐘，過濾收集上清液。
5.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：采用高效液相色譜法對提取樣品中腺苷酸進行分離，并對其中ATP、ADP、AMP含量定量，測定條件為紫外檢測器，波長260nm，C18反相柱，流動相為PH＝7.0-7.5、50-200mM的K2PO4，3-10mM的TBABr，流速0.5-1.0ml/min。
6.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：能荷的計算方法為
能荷＝([ATP]+0.5[ADP])/([ATP]+[ADP]+[AMP])
能荷＜0.5表明細胞已經走向凋亡；能荷＞0.5表明細胞存活，且數值越高細胞活性越好。
7.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：包埋在微囊內的細胞可以是貼壁培養或懸浮培養的動物細胞、植物細胞以及微生物細胞。
8.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：制備微膠囊的材料包括海藻酸鈉、聚乳酸、明膠或殼聚糖。
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