[發明專利]產前篩查β-人絨毛膜促性腺激素測定試劑盒(時間分辨熒光免疫法)及其制備方法

有效

• 申請號: 200910213631.0
• 申請日: 2009-12-08
• 公開（公告）號: CN101819210A
• 公開（公告）日: 2010-09-01
• 發明（設計）人: 吳道貧;汪勤;季濤;李貴情;譚玉華;何海榮;馮健明;沈健;鄭元升;劉勝利
• 申請（專利權）人: 廣州市豐華生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是涉及孕早期和孕中期產前篩查的試劑盒，特別涉及一種孕早期和孕中期產前篩查β-人絨毛膜促性腺激素測定試劑盒(時間分辨熒光免疫分析法)的制備方法，結合了單克隆抗體制備技術、固相抗體包被技術、鑭系元素離子標記技術、濾紙干血片制備技術和時間分辨免疫熒光技術。?

背景技術

產前篩查(Prenatal?Screening)是指通過經濟、簡便和較少創傷的檢測方法，從孕婦群體中篩選出懷有某些先天缺陷胎兒的高危孕婦并進行診斷，從而最大限度地減少缺陷兒的出生。產前篩查可在妊娠早期(7～13周)和妊娠中期(14～21周)進行，其篩查最主要的疾病是唐氏綜合征(Down’s?Sydrome，DS)。產前篩查系統由體外診斷試劑、檢測儀器和篩查分析軟件組成。β-人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)是目前常用于產前篩查的血清學標志物之一。?

絨毛膜促性腺激素(hCG)是胎盤的合體滋養層分泌的一種糖蛋白，為胎盤中最重要的激素，由α和β亞基組成，兩個亞基可彼此結合，也可游離于血液中。孕婦血清中的hCG主要以完整的形式存在，游離β-hCG占總hCG的1～8％。妊娠期母血清中β-HCG水平呈雙峰曲線，第1峰于妊娠12周前后，15周后出現生理性下降，20～32周維持低而平穩水平，26周達最低。第2峰于妊娠37周，明顯低于第1峰，至妊娠足月時稍有下降。在妊娠11周內，血清β-HCG的含量與孕齡密切相關，隨妊娠進展呈直線上升，孕齡每增加1天，β-HCG平均增加1.53IU/ml，分娩后急劇下降，產后4天降至1IU/ml，產后9天基本消失。?

唐氏綜合征又稱為先天愚型或21三體綜合征，是胎兒先天缺陷中最常見的一種，主要臨床表現：嚴重智力低下、愚型面容，約50％伴有先天性心臟病、小頭畸形等發育異常。其出生率約占活產新生兒的1/700～1/800，我國每年大約有26600個先天愚型癡呆兒出生，平均每20分鐘就出生一例。目前對DS尚未有治療方法，因此通過產前篩查找出高危孕婦，對其進行產前診斷，是減少患兒出生的重要手段。?

1987年Bargot發現懷有DS胎兒的孕婦血清中的hCG的水平是正常孕婦的2倍。以孕婦年齡再結合血清中hCG檢測，DS的篩查率可達到63％。1988年，倫敦Bartholomews醫院Wald提出AFP、β-HCG、uE₃三聯的篩查方法，得到廣泛應用，一直用到至今。?

胎兒患DS時，胎盤重量低于正常水平，組織器官發育不全，肝臟、胎盤的功能不良，因此孕婦血清中hCG濃度下降要比懷正常胎兒的孕婦晚3周左右，致使孕中期(約20周左右)母血清中的hCG濃度呈高水平狀態，懷DS兒孕婦血清中β-hCG濃度比正常孕婦至少高2倍(一般＞2.5MOM)。?

目前臨床上主要采用羊水穿刺或絨毛膜取樣等方法來進行產前診斷，不僅是創傷性的，而且有1％～2％的流產率。因此，對孕婦血清標志物的篩查是今后產前篩查的主要手段。?

時間分辨熒光免疫分析技術(Time-resolved?fluoroimmunoassay，TrFIA)又稱解離-增強鑭系熒光免疫分析(dissociation-enhancement?lanthanide?fluoroimmunoassay，DELFIA)，是用三價稀土離子及其螯合物作為示蹤物，當反應體系發生后，用時間分辨熒光免疫分析儀，測定反應物中的熒光強度，定量分析待測物質的含量。其靈敏度高，可達10^-17mol/孔，技術上具有獨特優勢，應用范圍廣泛。銪(Eu)標記時間分辨熒光免疫技術是一種非放射標記超微量免疫檢測技術，利用光譜分辨、時間分辨、解離-增強原理，具有熒光壽命極長、Stokes位移大、熒光特異性強、Eu³⁺離子的發光范圍寬的特點。TrFIA具有敏感性高、特異性強、重復性好、定量范圍寬、檢測速度快、標記物穩定、試劑盒保存期長等突出優點，成為繼放射免疫分析之后的新的里程碑。目前國外的TrFIA系統試劑盒已成商品化，主要用于激素類、癌抗原、蛋白質和多肽等項目的檢查。我國從20世紀80年代中期開始這方面的研究，目前國內也有部分試劑盒問世，但用于臨床檢測的項目并不多，許多項目亟待研究開發，并形成產業化。?