[發明專利]抗人CD20人源化抗體、其制備方法及用途

有效

• 申請號: 200910207822.6
• 申請日: 2009-10-30
• 公開（公告）號: CN102050879A
• 公開（公告）日: 2011-05-11
• 發明（設計）人: 郭亞軍;李博華;張大鵬;李彩輝;張彥
• 申請（專利權）人: 上海抗體藥物國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/85;C12P21/08;A61K39/395;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種抗體、其制備方法和用途。

背景技術

非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)是最常見的淋巴系統惡性腫瘤，好發于青壯年，其中絕大多數為B細胞來源，約占85％。在未治療狀態下，低度和部分中度惡性NHL如小淋巴細胞性淋巴瘤和濾泡型淋巴瘤的生長形式往往呈惰性過程，中位生存期為5～9年。它們對首次化療敏感，但很容易復發或耐藥，當再次化療或放療時，療效明顯降低，因而被認為是難以治愈的惡性腫瘤。而一些高度惡性的NHL則死亡率極高。

近年來，針對細胞表面分子的抗原靶向性治療已取得了巨大進展并成為一種非常有發展前途的治療方法，其中被廣泛使用且富有成效的是抗CD20的單抗制劑[Maloney?DG.Immunotherapy?for?non-Hodgkin′s?lymphoma：monoclonal?antibody?and?vaccines.J?Clin?Oncol.2005Sep?10；23(26)：6421-6428]。

CD20抗原是非結合性單抗療法的一個理想靶點，因為該抗原具有克隆特異性，僅表達于所有的前B細胞和成熟B細胞，而不表達于造血干細胞、漿細胞和其他造血細胞系；同時，CD20分子在B淋巴瘤細胞表面的表達量異常增高，磷酸化增加，與B細胞淋巴瘤的發生密切相關。CD20分子在超過95％的B細胞性NHL中均有表達，且抗原分子在膜上比較暴露，容易接近，與單抗結合后無顯著內化和脫落，也不會因與抗體的結合而發生抗原調變，因此成為治療B細胞淋巴瘤的理想靶點。

CD20單抗療法在治療B細胞淋巴瘤中已取得了令人滿意的效果，目前抗CD20抗體主要有以下幾種，按照其發揮抗腫瘤作用的不同功能分為兩大類：(1)主要通過CDC、ADCC(CDCC)作用發揮功能的：C2B8、1F5、2H7、2F2(2)主要通過凋亡、ADCC(CDCC)作用發揮功能的：B1、11B8。美國IDEC?phamaceutical公司針對B細胞淋巴瘤生產的人鼠嵌合抗CD20單克隆抗體Rituximab-C2B8是第一個經美國FDA批準用于治療淋巴瘤的抗體。1997年批準上市。美羅華是一種嵌合型IgG1免疫球蛋白，它是通過轉染相關基因結構到倉鼠卵細胞后表達的基因產物。美羅華含1328個氨基酸，分子量約144KD，由鼠抗CD20單克隆抗體的可變區Fab和人IgG1抗體穩定區Fc片段構成。

雜交瘤技術生產的鼠源單克隆抗體進入人體后可能引起人抗鼠抗體免疫應答human?antimouse?antibody?response(HAMA)[Winter?G，Harris?WJ.Humanized?antibodies.Immunol?Today.1993Jun；14(6)：243-6]。因此，如何通過基因工程技術來構建抗降低鼠源抗體的免疫原性的抗體，有效地減少HAMA反應的發生率是本領域的技術人員急于解決的問題。