[發明專利]一種精氨酸脫亞胺酶及其重組表達方法和應用

無效

• 申請號: 200910205114.9
• 申請日: 2009-09-25
• 公開（公告）號: CN101792752A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發明（設計）人: 李川江
• 申請（專利權）人: 廣州華銀醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N9/80
• 分類號: C12N9/80;C12N15/70;A61K38/50;A61K47/48;A61P35/00;A61P35/02;C12N11/08;C12R1/19
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;楊曉松

1.一種精氨酸脫亞胺酶，其特征在于：所述精氨酸脫亞胺酶的編碼氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所述。

2.根據權利要求1所述的一種精氨酸脫亞胺酶，其特征在于：所述精氨酸脫亞胺酶的編碼核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所述。

3.根據權利要求1所述的一種精氨酸脫亞胺酶的重組表達方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)設計合成了精氨酸脫亞胺酶的13個DNA模板：

DNA模板1：

5’-ATGTCTGTATTTGACAGTAAATTTAAGGGAATTCATGTCTATTCAGAAATTGGTGAACTAGAAACCGTTTTAGTTCACGAACCTGGTAAAGAAATTGATTACATTACCCCAGCTCGT-3’；

DNA模板2：

5’-TAATTCAACTTCATTAATTCCACGCTTTTTAAGTTCTGCTACGAATTCTTTGTGTTCTTTTCTTGCATCGTGGCTTTCTAGAATTGCTGAGAATAATAATTCATCGAAACGAGCTGGGGTAATGTA-3’；

DNA模板3：

5’-ATTAATGTTGTTGAATTAGTAGATCTAATCGTAGAAACCTATGATTTAGCATCAAAAGAAGCTAAAGAAAAACTTTTAGAAGAATTCCTAGATGATTCAGTACCAGTT-3’；

DNA模板4：

5’-TTTTAAATCGTGTTTAGTGATCCCTGCGATCATGTATTCAACTAATTTACGAGAAGTTTTTTTAGCTTTTAAGAAATTACGAACAGTAGCTTTGTGAGCTTCTGATAGAACTGGTACTGAATCATC-3’；

DNA模板5：

5’-ACTAAACACGATTTAAAAATCGAATCAGATTTAGAATTAATCGTTGACCCAATGCCTAACTTGTACTTCACTCGTGACCCATTTGCATCAGTAGGTAATGGAGTTACCATCCAC-3’；

DNA模板6：

5’-GTACCATGGGGTATTAACTAGTTTAGGGTGATTTGAAAATACAAATCGGCTAAATAATGTTTCACGTTGTCTTACTTTGTAACGCATGTAGTGGATGGTAACTCCATT-3’；

DNA模板7：

5’-GTTAATACCCCATGGTACTACGACCCTGCTGAAGGATTAACAATCGAAGGTGGAGACGTATTTATCTACAATAACGATACTTTAGTAGTTGGTGTTTCAGAAAGAACT-3’；

DNA模板8：

5’-CCAACGAGGAACATTAATTGCTACAATACGTTTGAATTCACATTCTTTATTTGCTTTAATGTTCTTAGCTAATAAAGTAATAGTTTGTAAGTCAGTTCTTTCTGAAACACC-3’；

DNA模板9：

5’-ATTAATGTTCCTCGTTGGACAAACCTAATGCACTTAGACACATGGTTAACAATGCTAGACAAAGATAAATTCTTATACTCACCTATTGCAAATGATGTGTTTAAATTCTGG-3’；

DNA模板10：

5’-ACCAATGATTGATTTCAATAAGTCTTCTAGAGGTAATCCATTGTCAACTGGTTGAGGAGCGTCTCCGCCATTAACTAAATCGTAGTCCCAGAATTTAAACACATC-3’；

DNA模板11：

5’-TTGAAATCAATCATTGGTAAGAAACCTACTCTAATTCCTATTGCTGGTGCTGGTGCTTCACAAATC?GATATTGAACGTGAAACCCACTTTGACGGAACAAACTACATT-3’；

DNA模板12：

5’-GAATGGTAGAACTTTAATTCCTGCAGCTTCTAAAGCGGCATTTGTTTTTTCGTTACGTGCATAACCAATAACAACTCCAGGTTTAATAGCAATGTAGTTTGTTCCGTC-3’；

DNA模板13：

5’-ATTAAAGTTCTACCATTCAGAGGAAACCAACTTTCACTTGGAATGGGAAATGCTCGTTGCATGTCACGCCCTCTATCACGTAAAGATGTTAAGTGG-3’；

所述13個DNA模板的5’末端和3’末端的18對脫氧核糖核苷依次互補；

(2)設計引物P1和P2，

P1：5’-CATATGTCTGTATTTGACAGTAA-3’，其中5’末端包括一個內切酶Nde?I位點；

P2：5’-GGATCCTTACCACTTAACATCTTTAC-3’，其中3’末端包括一個內切酶BamH?I位點；

(3)進行常規鏈式聚合酶反應擴增精氨酸脫亞胺酶基因片段；

(4)將精氨酸脫亞胺酶基因片段和質粒用內切酶Nde?I和BamH?I進行雙酶切，純化、連接獲得重組質粒；

(5)將重組質粒轉化到受體細胞中表達，篩選、擴增、分離、純化，獲得精氨酸脫亞胺酶。