[發(fā)明專利]稻稈碳源培養(yǎng)彩絨革蓋菌誘導(dǎo)草酸脫羧酶的方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200910200930.0 | 申請(qǐng)日： | 2009-12-25 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN101724617A | 公開（公告）日： | 2010-06-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 洪楓;楊雪霞;楊光;曹張軍 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 東華大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N9/88 | 分類號(hào)： | C12N9/88 |
| 代理公司： | 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233 | 代理人： | 黃志達(dá);謝文凱 |
| 地址： | 201620 上海市*** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 稻稈 碳源 培養(yǎng) 彩絨革蓋菌 誘導(dǎo) 草酸 脫羧酶 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬草酸脫羧酶的制備領(lǐng)域，特別是涉及一種稻稈碳源培養(yǎng)彩絨革蓋菌誘導(dǎo)草酸 脫羧酶的方法。
背景技術(shù)
草酸脫羧酶可以催化草酸脫羧形成甲酸和二氧化碳，因此在酶法檢測(cè)草酸含量，降解 工業(yè)廢水中草酸鹽，制備低草酸含量食品以及降低人體內(nèi)草酸濃度等方面具有廣闊的應(yīng)用 前景。彩絨革蓋菌作為生產(chǎn)草酸脫羧酶的重要菌種，如何降低其培養(yǎng)成本，大量生產(chǎn)菌絲 體，并誘導(dǎo)菌絲體合成草酸脫羧酶是一項(xiàng)重要課題。由于碳元素是生物體內(nèi)含量最多的元 素，因此碳源是培養(yǎng)基中用量最大的一種，占生物產(chǎn)品總成本的比例較高，所以通過(guò)利用 低成本碳源替代目前使用的純凈葡萄糖能大幅度降低微生物的培養(yǎng)成本。
秸稈是農(nóng)作物收割后的剩余物，作為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的副產(chǎn)品，農(nóng)村中每年大量的秸稈主要 用來(lái)燒火，或者粉碎后給家畜做飼料用。雖然焚燒后的秸稈可以撒在田里作為肥料，但在 焚燒過(guò)程中產(chǎn)生的氣體會(huì)導(dǎo)致溫室效應(yīng)的增加，而且產(chǎn)生的煙塵也會(huì)造成空氣污染。所以， 將秸稈水解后獲得的水解液來(lái)作為培養(yǎng)工業(yè)微生物的碳源，不僅可以降低微生物培養(yǎng)成 本，減輕焚燒對(duì)環(huán)境的污染，而且提高了秸稈應(yīng)用附加值，具有重大的經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)境效 益。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種稻稈碳源培養(yǎng)彩絨革蓋菌誘導(dǎo)草酸脫羧酶的 方法，該方法簡(jiǎn)單，成本低，效率高；底物誘導(dǎo)產(chǎn)草酸脫羧酶不受抑制，產(chǎn)酶量穩(wěn)定。
本發(fā)明的一種稻稈碳源培養(yǎng)彩絨革蓋菌誘導(dǎo)草酸脫羧酶的方法，包括：
(1)將粉碎的稻稈按照固液比為1g∶5-15mL用酸溶液浸泡10-20h，在100-150℃ 條件下水解反應(yīng)20-60min，離心去除殘?jiān)螅玫降径捤庖海⒂肈NS法測(cè)定水解液 中還原糖含量(以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)糖計(jì))；
(2)按7-30g/L的還原糖量，將稻稈水解液配制發(fā)酵培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為4.0-5.0， 過(guò)濾除去雜質(zhì)，并添加氮源和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)獲得發(fā)酵培養(yǎng)基，檢查并調(diào)節(jié)pH值至 4.0-5.0，滅菌后備用；
(3)取2-3片直徑為9～11mm含菌絲體的瓊脂培養(yǎng)基，接入液體種子培養(yǎng)基，在30 ℃靜置培養(yǎng)4-6天；待菌絲體在液體培養(yǎng)基上方形成白色菌絲群但尚未浮出水面時(shí)，將菌 絲體和培養(yǎng)基全部轉(zhuǎn)移到含有無(wú)菌玻璃珠的容器中，對(duì)菌絲體進(jìn)行震蕩破碎獲得含有菌絲 碎片的懸濁液，以3-15％的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在20-30℃和100-250rpm轉(zhuǎn)速條件下 培養(yǎng)4-6天；
(4)待菌絲球形成時(shí)，加入終濃度為5-20mM的草酸誘導(dǎo)草酸脫羧酶的產(chǎn)生，培養(yǎng) 0.5-6天后獲取菌絲體；菌絲體經(jīng)液氮冷凍后研磨破碎，用0.2M，pH?3.7的醋酸緩沖液提 取菌絲碎片，離心去除殘?jiān)蒙锨逡杭礊椴菟崦擊让复置敢骸?
所述步驟(1)中的酸為硫酸、鹽酸、醋酸，質(zhì)量百分比濃度為0.5％-8％。
所述步驟(2)用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值。
所述步驟(2)中的發(fā)酵培養(yǎng)基中組分為：稻稈水解物中的還原糖7-30g(以葡萄糖為 標(biāo)準(zhǔn)糖計(jì))，蛋白胨3.0g，KH2PO41.0g，Na2HPO4·12H2O?0.2g，MgSO4·7H2O?0.5g以及 微量元素1ml，用水定容至1L；
所述的微量元素的組分為：FeSO4·7H2O?10g，MnSO4·H2O?1.0g，ZnSO4·7H2O?1.0g， CuSO4·5H2O?2.0g，CaCl2·2H2O?13g，用水定容至1L；
所述步驟(3)中的液體種子培養(yǎng)基，以葡萄糖代替發(fā)酵培養(yǎng)基中的還原糖，其余組 分含量與發(fā)酵培養(yǎng)基相同。
本發(fā)明通過(guò)水解稻稈獲得培養(yǎng)彩絨革蓋菌生長(zhǎng)的碳源，并用底物草酸誘導(dǎo)菌絲體合成 草酸脫羧酶。
有益效果
(1)本發(fā)明利用稻稈水解液作為發(fā)酵培養(yǎng)彩絨革蓋菌的碳源，方法簡(jiǎn)單，易于操作；
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