[發明專利]稻稈碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法

無效

• 申請號: 200910200930.0
• 申請日: 2009-12-25
• 公開（公告）號: CN101724617A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 洪楓;楊雪霞;楊光;曹張軍
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.一種稻稈碳源培養彩絨革蓋菌(Coriolus?versicolor)誘導草酸脫羧酶的方法，包括：

(1)將粉碎的稻稈按照固液比為1g∶5-15ml用酸溶液浸泡10-20h，在100-150℃條件 下水解反應20-60min，離心去除殘渣后，得到稻稈水解液，并用DNS法測定水解液中還 原糖含量；

(2)按7-30g/L的還原糖量，將稻稈水解液配制發酵培養基，調節pH值為4.0-5.0， 過濾除去雜質，并添加氮源和無機鹽獲得發酵培養基，再檢查并調節pH值至4.0-5.0，滅 菌后備用；

(3)取2-3片直徑為9～11mm含菌絲體的瓊脂培養基，接入液體種子培養基，在30 ℃靜置培養4-6天；待菌絲體在液體培養基上方形成白色菌絲群但尚未浮出水面時，將菌 絲體和培養基全部轉移到含有無菌玻璃珠的容器中，對菌絲體進行震蕩破碎獲得含有菌絲 碎片的懸濁液，以3-15％的接種量接入發酵培養基，在20-30℃和100-250rpm轉速條件下 培養4-6天；

(4)待菌絲球形成時，加入終濃度為5-20mM的草酸誘導草酸脫羧酶的產生，培養 0.5-6天后獲取菌絲體；菌絲體經液氮冷凍后研磨破碎，用0.2M，pH?3.7的醋酸緩沖液提 取菌絲碎片，離心去除殘渣，所得上清液即為草酸脫羧酶粗酶液。

2.根據權利要求1所述的一種稻稈碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在 于：所述步驟(1)中的酸為硫酸、鹽酸或醋酸，質量百分比濃度為0.5％-8％。

3.根據權利要求1所述的一種稻稈碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在 于：所述步驟(2)用氫氧化鈉溶液調節pH值。

4.根據權利要求1所述的一種稻稈碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在 于：所述步驟(2)中的發酵培養基中組分為：稻稈水解物中的還原糖7-30g，蛋白胨3.0 g，KH₂PO₄1.0g，Na₂HPO₄·12H₂O?0.2g，MgSO₄·7H₂O?0.5g以及微量元素1ml，用水定 容至1L。

5.根據權利要求4所述的一種稻稈碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在 于：所述的微量元素的組分為：FeSO₄·7H₂O?10g，MnSO₄·H₂O?1.0g，ZnSO₄·7H₂O?1.0g， CuSO₄·5H₂O?2.0g，CaCl₂·2H₂O?13g，用水定容至1L。

6.根據權利要求1所述的一種稻稈碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在 于：所述步驟(3)中的液體種子培養基，以葡萄糖代替發酵培養基中的還原糖，其余組 分與發酵培養基相同。