[發(fā)明專利]克林霉素磷酸酯的雜質(zhì)分析制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910198983.3
• 申請日: 2009-11-18
• 公開（公告）號: CN102062758A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李悅;吳彤;陳述增;王慧敏;孫秋實;李志敏
• 申請（專利權(quán)）人: 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08;G01N30/89;C07H15/16;A61K31/7056;A61P31/04
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 鄭立柱

1.一種克林霉素磷酸酯的雜質(zhì)分析制備方法，其特征在于對克林霉素磷酸酯原料進(jìn)行分析，并從中分離制備所述雜質(zhì)，包括下列步驟：

a)用LC-MS法測定所述克林霉素磷酸酯原料，根據(jù)被分析成分的相對保留時間和/或分子量確定所述原料中的一種或多種雜質(zhì)；

c)根據(jù)步驟a)中所述的一種或多種雜質(zhì)的相對保留時間所顯示的色譜保留行為確定制備色譜法的條件，用制備色譜法收集所述相對保留時間對應(yīng)的一種或多種雜質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟a)和c)之間還包括下列步驟：

b)根據(jù)步驟a)中所述的一種或多種雜質(zhì)的相對保留時間和/或分子量確定柱層析法的條件，使用反相硅膠柱層析法富集該相對保留時間和/或分子量對應(yīng)的一種或多種雜質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用的流動相pH值為4.00～5.00。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用的柱溫為20℃～40℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用的流動相包含15％～25％乙腈。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用的流動相包含0.1％～0.3％氨水。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用HPLC條件為：

流動相20％乙腈，0.1％氨水；

pH甲酸調(diào)pH至4.90；

柱溫25℃；

流速1.0ml/min；

檢測波長210nm；

色譜柱Diamonsil?ODS?C18，5μm，250×4.6mm柱。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟b)中，所述的反相硅膠柱層析法富集采用的固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠填料，流動相為甲醇。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟b)包括：

b1-將樣品溶解于去離子水后，濕法上柱；

b2-依次用10％甲醇200ml、20％甲醇200ml、30％甲醇200ml、40％甲醇200ml、50％甲醇200ml、60％甲醇200ml、70％甲醇200ml、80％甲醇200ml、90％甲醇200ml、100％甲醇200ml洗脫；每個濃度梯度分4批接收，每批接收約50ml；

b3-合并收集40％甲醇第4批和50％甲醇第1批的洗脫液備用。

10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟c)中，所述的制備色譜法所采用條件包括：

流動相15％～25％乙腈，0.1～0.3％氨水；

pH甲酸調(diào)pH至4.00～5.00；

柱溫：20℃～40℃；

色譜柱Waters?μBondapak?ODS?C18，5μm，7.8mm×300mm柱，或者Agela?Venusil?ODS?XBP?C18，5μm，10mm×250mm柱。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，步驟c)中，所述的制備色譜法所采用條件為：

流動相20％乙腈，0.1％氨水；

pH甲酸調(diào)pH至4.00；

流速1.0ml/min；

進(jìn)樣量160μl；

檢測波長210nm；

色譜柱Waters?μBondapak?ODS?C18，5μm，7.8mm×300mm柱；

收集保留時間為12.848分鐘處的峰相對應(yīng)的被分析物。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，步驟c)中，所述的制備色譜法所采用條件為：

流動相22％乙腈，0.1％氨水；

pH甲酸調(diào)pH至4.00；

流速1.0ml/min；

檢測波長210nm；

色譜柱Agela?Venusil?ODS?XBP?C18柱，5μm，10mm×250mm柱；

進(jìn)樣量120μl；

收集保留時間為14.9分鐘處的峰相對應(yīng)的被分析物。