[發(fā)明專利]一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910198538.7
• 申請日: 2009-11-10
• 公開（公告）號: CN101738404A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 冀秀玲;劉洋
• 申請（專利權(quán)）人: 東華大學(xué)
• 主分類號: G01N23/06
• 分類號: G01N23/06;G01N1/28
• 代理公司: 上海泰能知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233
• 代理人: 黃志達(dá);謝文凱

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于對甲狀腺激素T₄干擾活性的檢測領(lǐng)域，特別涉及一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法。

背景技術(shù)

溴系阻燃劑目前被認(rèn)為是普遍存在的持久性有機(jī)污染物，在它的生產(chǎn)、使用和廢物處置階段都會(huì)不同程度地釋放到環(huán)境中。溴系阻燃劑主要可分為多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)，多溴聯(lián)苯(PBBs)，四溴雙酚A(TBBPA)和六溴環(huán)十二烷(HBCD)等四大類。溴系阻燃劑的阻燃效率高，熱穩(wěn)定性好，添加量少，對材料性能影響小，價(jià)格便宜，因而作為一種添加型阻燃劑被廣泛地應(yīng)用于家用電器、室內(nèi)裝璜中的泡沫塑料、地毯和布料之中；同時(shí)，含溴系阻燃劑的塑料也大量用于與電源、電路、發(fā)熱體等密切相關(guān)的電子電器設(shè)備，轎車、公共汽車、火車和飛機(jī)等，與人們的生活息息相關(guān)。

溴系阻燃劑及其代謝產(chǎn)物與甲狀腺激素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有很高的結(jié)合活性，表明溴系阻燃劑可能會(huì)與體內(nèi)的T₄甲狀腺激素競爭結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，通過干擾甲狀腺激素的轉(zhuǎn)運(yùn)過程，干擾體內(nèi)甲狀腺激素的動(dòng)態(tài)平衡。它對甲狀腺激素的干擾體現(xiàn)在多個(gè)方面，比如直接損傷甲狀腺，造成甲狀腺肥大；改變甲狀腺激素水平，加速甲狀腺激素清除；或者與甲狀腺激素競爭結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法，該方法步驟簡單，快速，高效率且靈敏性高，該方法在很低濃度的條件下也能測試化合物的TTR結(jié)合活性，并得到了各化學(xué)品較理想的抑制曲線。

本發(fā)明的一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法，包括：

(1)加樣

樣品組：在反應(yīng)管中依次加入0.1M?Tris-HCl緩沖液140～145uL、30nM轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TTR2～5uL、55nM¹²⁵I-T₄45～50uL、1～5uL濃度為8×10^-5mol/L～8×10^-6mol/L的競爭劑，以及0～9uL的二甲亞砜或二氯甲烷使競爭結(jié)合反應(yīng)液最終體積為200uL；

對照組：在反應(yīng)管中依次加入0.1M?Tris-HCl緩沖液140～145uL、30nM轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TTR2～5uL、55nM¹²⁵I-T₄45～50uL以及5～10uL的二甲亞砜或二氯甲烷，使反應(yīng)液最終體積為200uL；

(2)孵育：將上述兩組反應(yīng)液分別在4℃下孵育12～24h，以達(dá)到競爭結(jié)合平衡；

(3)分離：孵育結(jié)束后，除去未與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TTR結(jié)合的游離¹²⁵I-T₄；

(4)測量：用γ計(jì)數(shù)儀測量收集到的離心液體放射性，單位為cpm(每分鐘放射性計(jì)數(shù))；

(5)計(jì)算：由每管每分鐘放射性計(jì)數(shù)cpm，求出樣品組與對照組每分鐘放射性計(jì)數(shù)cpm的比值，即為¹²⁵I-T4和待測化合物與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TTR孵育競爭結(jié)合的能力。

所述步驟(1)中的0.1M?Tris-HCl緩沖液的組分濃度為0.1M?Tris-HCl，0.1M?NaCl和0.1mM?EDTA，pH＝8.0；具體配制步驟如下：稱量12.11g?Tris，5.856g?NaCI和0.0370g?EDTA，加入780～800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙猓偌尤?～4ml濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.0，定容至1L；

所述步驟(1)中的競爭劑為含溴阻燃劑類污染物，具體為四溴雙酚A(TBBPA)、六溴環(huán)十二烷HBCD、2，2′，4，4′-四溴聯(lián)苯醚(BDE-47)或環(huán)境樣本萃取液，環(huán)境樣本萃取液利用PUF大氣被動(dòng)采樣裝置采集室內(nèi)空氣，以二氯甲烷為萃取劑用索氏抽提法抽提48小時(shí)得到。

所述步驟(3)中的分離是指用0.1M?Tris-HCl緩沖液預(yù)先平衡1ml的Sephadex?G25葡聚糖凝膠離心柱，以3000rpm離心2min，棄離心出的液體；取100uL競爭結(jié)合反應(yīng)液加到Sephadex?G25葡聚糖凝膠離心柱上，再3000rpm離心2min，并收集離心出的液體。