[發明專利]一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法

無效

• 申請號: 200910198538.7
• 申請日: 2009-11-10
• 公開（公告）號: CN101738404A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發明（設計）人: 冀秀玲;劉洋
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: G01N23/06
• 分類號: G01N23/06;G01N1/28
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法，包括：

(1)加樣

樣品組：在反應管中依次加入0.1M?Tris-HCl緩沖液140～145uL、30nM轉運蛋白TTR2～5uL、55nM?¹²⁵I-T₄45～50uL、1～5uL濃度為8×10^-5mol/L～8×10^-6mol/L的競爭劑，以及0～9uL的二甲亞砜或二氯甲烷使競爭結合反應液最終體積為200uL；

對照組：在反應管中依次加入0.1M?Tris-HCl緩沖液140～145uL、30nM轉運蛋白TTR2～5uL、55nM?¹²⁵I-T₄45～50uL以及5～10uL的二甲亞砜或二氯甲烷，使反應液最終體積為200uL；

(2)孵育：將上述兩組反應液分別在4℃下孵育12～24h；

(3)分離：孵育結束后，除去未與轉運蛋白TTR結合的游離¹²⁵I-T₄；

(4)測量：用γ計數儀測量收集到的離心液體放射性，單位為cpm；

(5)計算：由每管每分鐘放射性計數，求出樣品組與對照組每分鐘放射性計數的比值，即為¹²⁵I-T4和待測化合物與轉運蛋白TTR孵育競爭結合的能力。

2.根據權利要求1所述的一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的0.1M?Tris-HCl緩沖液的組分濃度為0.1M?Tris-HCl，0.1M?NaCl和0.1mM?EDTA，pH＝8.0。

3.根據權利要求2所述的一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法，其特征在于：所述步驟的0.1M?Tris-HCl緩沖液具體配制步驟如下：稱量12.11g?Tris，5.856g?NaCl和0.0370g?EDTA，加入780～800mL的去離子水，充分攪拌溶解，再加入3～4ml濃鹽酸調節pH值至8.0，定容至1L。

4.根據權利要求1所述的一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的競爭劑為含溴阻燃劑類污染物，具體為四溴雙酚A、六溴環十二烷、2，2′，4，4′-四溴聯苯醚或環境樣本萃取液。

5.根據權利要求1所述的一種測定含溴阻燃劑類污染物的甲狀腺干擾活性的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的分離是指用0.1M?Tris-HCl緩沖液預先平衡1ml的Sephadex?G25葡聚糖凝膠離心柱，以3000rpm離心2min，棄離心出的液體；取100uL競爭結合反應液加到Sephadex?G25葡聚糖凝膠離心柱上，再3000rpm離心2min，并收集離心出的液體。