[發(fā)明專利]一種定量檢測(cè)AKAP12甲基化水平的方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910196054.9
• 申請(qǐng)日: 2009-09-22
• 公開（公告）號(hào): CN102021233A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉維薇;關(guān)明;呂元;李敏;劉春芳;林勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴;包兆宜

1.一種定量檢測(cè)AKAP12甲基化水平的方法，其特征在于，對(duì)樣品DNA進(jìn)行修飾后，分別以樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，進(jìn)行高分辨率熔解曲線分析，然后根據(jù)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品差異顯示的熒光強(qiáng)度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，最后將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的曲線比較獲得樣品AKAP12甲基化百分比。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，以甲基化敏感性高分辨融解曲線制作方法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，對(duì)樣品DNA進(jìn)行修飾時(shí)，將樣品DNA中未甲基化的位點(diǎn)與甲基化的位點(diǎn)修飾成不同的基團(tuán)。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，進(jìn)行PCR擴(kuò)增的引物是5’-GGCGGTTGTTTGGATTTGGGTT-3’和5’-AACACGCCCTACAACAACATCTA-3’。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，進(jìn)行高分辨率熔解曲線分析的條件為：95℃2min，40℃2min預(yù)處理后，熔解溫度76～88℃，每升高0.1℃采集一次數(shù)據(jù)。

6.權(quán)利要求1、2、3、4或者5所述的方法用于制備腫瘤診斷試劑。

7.權(quán)利要求1、2、3、4或者5所述的方法在制備診斷結(jié)直腸癌診斷試劑中的應(yīng)用。

8.一種定量檢測(cè)AKAP12甲基化水平的試劑盒，其特征是該試劑盒含有制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性質(zhì)控和陰性質(zhì)控反應(yīng)體系。