[發明專利]軍曹魚精子超低溫保存方法

無效

• 申請號: 200910193584.8
• 申請日: 2009-10-28
• 公開（公告）號: CN101711522A
• 公開（公告）日: 2010-05-26
• 發明（設計）人: 湯保貴;陳剛;張建東;周暉;施鋼;潘傳豪;黃建盛
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;A01K61/00;C12N5/076
• 代理公司: 湛江市三強專利事務所 44203
• 代理人: 龐愛英

技術領域

本發明屬于水產養殖技術領域，特別是一種軍曹魚精子超低溫保存方法。

背景技術

目前，軍曹魚養殖生產所需的苗種全部來自于人工繁育，而人工繁殖經常會出現雌雄魚成熟不一致或性比不當導致精子不能充分利用的問題。而且，魚類精子質量、數量存在季節性變化，導致階段性受精率不足。因此，開發應用精子保存技術，有助于提高軍曹魚精子利用率，增加苗種繁育量，提高經濟效益。

關于魚類精子的保存，一般分為常溫、低溫和超低溫等三種方法。常溫保存可將精子壽命延長幾分鐘至幾小時；低溫保存可將精子壽命延長幾天至十幾天；超低溫保存則是在-196℃條件下，讓精子的運動和代謝完全停止，理論上可以無限期的保存，解凍復活后恢復授精能力。國外研究者已經對大西洋比目魚、大菱鲆、虹鱒、金頭鯛、尖吻鱸、大西洋鱈等少數幾種海水魚類的精子超低溫保存技術開展了研究。國內的相關研究主要側重于鯽魚、南方鲇、鯉魚等淡水魚類。迄今，國內外關于軍曹魚精子超低溫保存方面的研究尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是為了克服上述現有技術存在的不足，提供一種軍曹魚精子超低溫保存方法。

為了實現上述發明目的，本發明采取的技術方案是：該軍曹魚精子超低溫保存方法是將采集的新鮮精液按體積比1∶3的比例與精子保存液逐步稀釋并混和均勻，在20秒內完成，然后平置于液氮液面上預冷5分鐘，預冷溫度-70～-80℃，然后再放入-196℃的液氮中長期保存；使用時將保存的精子在37～40℃溫度下解凍，時間3～4秒，再移入精子活化液中活化，然后進行授精。

所述精子保存液的配方及配制方法：

精子保存基液的配方：NaCl?65～75mmol/l、KCl?1.45～1.5mmol/l、CaCl₂2.5～2.7mmol/l、NaHCO₃?20～25mmol/l、MgCl₂?5.7～6.1mmol/l、葡萄糖150～200mmol/l；小牛血清9.4～10mg/ml，按配方制備精子保存基液，然后調PH值至7.8，再加入9～10％體積的抗凍劑，得到精子保存液；

所述活化液配方為：NaCl?7.6～8g/l，KCl?0.4～0.45g/l，CaC₁₂·2H₂O0.18～0.19g/l，NaHCO₃?0.35～0.4g/l?MgSO₄?0.09～0.10g/l，KH₂PO₄?0.06～0.07g/l，Na₂HPO₄?0.045～0.05g/l，D-glucose?0.8～1.2g/l。

所述活化液配方為：NaCl?8g/l，KCl?0.4g/l，CaC₁₂·2H₂O?0.185g/l，NaHCO₃?0.35g/l，MgSO₄?0.098g/l，KH₂PO₄?0.06g/l，Na₂HPO₄?0.048g/l，D-glucose?1g/l。

所述抗凍劑為二甲亞楓。

本發明的軍曹魚精子超低溫保存方法，有助于提高軍曹魚精子利用率，增加苗種繁育量，提高經濟效益。該技術不僅可以用于魚類人工繁育，對于開展魚類資源恢復與重建也具有重要的意義。

附圖說明

圖1是本發明技術流程圖。

具體實施方式

準確配制精子保存基液和精子活化液，精子保存液的配方及配制方法：先配制精子保存基液，精子保存基液的配方：氯化鈉(NaCl)65～75mmol/l、氯化鉀(KCl)1.45～1.5mmol/l、氯化鈣(CaCl₂)2.5～2.7mmol/l、碳酸鈉(NaHCO₃)20～25mmol/l、氯化鎂(MgCl?₂)5.7～6.1mmol/l、葡萄糖150～200mmol/l、小牛血清9.4～10mg/ml，按配方制備精子保存基液，用1mol/l的碳酸氫鈉將精子保存基液的pH值調至7.8，再加入9～10％體積的二甲亞楓作為抗凍劑，得到精子保存液。