[發明專利]檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的毛細管電泳方法

無效

• 申請號: 200910192208.7
• 申請日: 2009-09-09
• 公開（公告）號: CN101658559A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發明（設計）人: 吳虹;葉秋芳;宗敏華
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: A61K36/704
• 分類號: A61K36/704;A61P1/14;A61P17/00;G01N30/02;G01N30/58;A61K125/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司
• 代理人: 裘 暉

技術領域

本發明屬于分析檢測技術領域，特別涉及一種同時檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的毛細管電泳方法。

背景技術

毛細管電泳是20世紀80年代以來興起的一種新的分離分析技術，具有分辨率高、分析時間短、溶劑和樣品消耗量少、樣品預處理簡單，可同時分離測定多組分樣品等優點，在藥物分析檢測中的應用日益廣泛。

中藥何首烏為蓼科植物何首烏的干燥塊根，主產于我國廣東、四川、湖南、貴州等地，具有補肝腎、益精血、烏須發、強筋骨等功效。研究表明何首烏主要活性成分為二苯乙烯苷和蒽醌類物質。目前，中國藥典(2005年版)何首烏質量標準中僅對二苯乙烯苷進行定量控制，而何首烏的許多藥理活性卻與其含有的蒽醌類成分密切相關。目前，已有多種分別檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類化合物的方法，如可采用薄層色譜法、液相色譜法、分光光度法、酶化學發光法和毛細管電泳法等進行二苯乙烯苷的檢測，而蒽醌類成分的分析方法主要有分光光度法、薄層掃描法、薄層比色法、紙層析法、液相色譜法和毛細管電泳法等。但迄今尚未見同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的報道。對何首烏有效活性成分的同時檢測，可以綜合地反映出何首烏的質量，能夠更有效地對何首烏進行質量控制。

發明內容

為了解決上述現有技術的不足之處，本發明的首要目的在于提供一種能夠快速、高效地同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的毛細管電泳方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分(大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚)的毛細管電泳方法，該方法的檢測步驟如下：

(1)將二苯乙烯苷對照品、大黃素對照品、蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品溶于甲醇中，制成上述各種對照品濃度均為50μg/mL的對照品混合液；采用膠束電動毛細管色譜法，在最佳檢測條件下，對對照品混合液進行毛細管電泳分析，獲得對照品混合液的電泳圖譜；

(2)采用膠束電動毛細管色譜法，在最佳檢測條件下，對何首烏樣品提取液進行毛細管電泳分析，獲得樣品液的電泳圖譜；

(3)分別根據二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚或大黃素甲醚的校正曲線方程，根據步驟(2)所得電泳圖譜中各對應物質峰面積，計算出何首烏提取液中二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚或大黃素甲醚的濃度；

所述最佳檢測條件是：內徑為75μm、有效長度為50cm的未涂層熔融石英毛細管、電泳緩沖液組成為15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸鈉-體積比10％甲醇、pH為9.6、分離電壓為25kV、檢測溫度為25℃、進樣壓力為0.5psi、進樣時間為10秒和檢測波長為254nm。

步驟(2)中所述何首烏樣品提取液是按以下操作步驟進行：將何首烏的干燥塊根粉碎，過80～120目篩，取粉末0.2～1.0g，加入甲醇30～60mL，用甲醇超聲提取15～30min，過濾，得濾液和濾渣；將濾渣用5～15mL甲醇洗滌2～4次，將洗滌液和上述濾液合并，減壓蒸發除去溶劑后加入5mL甲醇溶解，搖勻，經0.22μm濾膜過濾，得到何首烏樣品提取液。

所述超聲提取是采用60W的超聲提取。

對毛細管進行以下處理：

(1)毛細管在第一次使用前，按以下的程序進行預處理：先用甲醇沖洗10min，去離子水沖洗2min，接著用0.1mol/L鹽酸沖洗10min，去離子水沖洗2min，最后用0.1mol/L氫氧化鈉溶液沖洗10min，去離子水沖洗2min。

(2)每次操作之前，毛細管依次分別用0.1mol/L鹽酸、去離子水、0.1mol/L氫氧化鈉、去離子水沖洗5min，然后再用電泳緩沖液沖洗5min。連續檢測時，每次進樣前毛細管用電泳緩沖液沖洗2min。

在最佳檢測條件下，二苯乙烯苷和蒽醌類成分在18min內達到基線分離；遷移時間和峰面積的日內RSD值分別為0.43～0.79％和0.98～1.87％；遷移時間和峰面積在6天內的日間RSD值分別為0.74～1.53和1.18～2.39％；檢測限(信噪比S/N＝3)為0.26～0.56μg/mL；加標回收率為98.5～104.0％。