[發明專利]利用噴墨打印技術制備梯度蛋白模版的方法

無效

• 申請號: 200910191951.0
• 申請日: 2009-12-16
• 公開（公告）號: CN101735946A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發明（設計）人: 蔡開勇;董海德
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 謝殿武

1.利用噴墨打印技術制備梯度蛋白模版的方法，其特征在于：包括如下步驟：

a.對噴墨打印機進行改裝，步驟為：將噴射液裝入帶有芯片的空墨盒后再將墨盒裝于打印機上，以至少兩個由虹吸管連接起來的容器作為連續供墨系統，所述連續供墨系統一端與墨盒連通，另一端與噴射液貯池連通，所述噴射液為0.25-2mM端-COOH基硫醇的有機溶液；

b.依據灰度值與標準圖案的靜態接觸角的關系優化設計打印模版的灰度梯度，得線性優化灰度區間；

c.以噴金硅片作為初始基材、以線性優化灰度區間的灰度梯度為基準將端-COOH基的硫醇分子打印到初始基材上；

d.將打印所得的基材于反浸液中反浸5-30min后再于EDC/NHS體系中活化處理5-30min，所述反浸液為濃度不低于0.2mM的端-OH基硫醇的有機溶液；

e.將活化所得的基材與目標蛋白進行偶聯，得梯度蛋白模版。

2.根據權利要求1所述的利用噴墨打印技術制備梯度蛋白模版的方法，其特征在于：所述線性優化灰度區間的具體設計方法如下：

(1)設計0-255區間的灰度值；

(2)以飽和端-COOH基硫醇的有機溶液為噴射液、從0-255灰度值中篩選不同灰度值并以所篩選的灰度值為基準打印圖案，以所得圖案作為標準圖案分別測量相應灰度圖案的靜態接觸角，依據灰度值與靜態接觸角的關系作曲線，得線性優化灰度區間。

3.根據權利要求2所述的利用噴墨打印技術制備梯度蛋白模版的方法，其特征在于：所述噴射液為濃度為0.25-2mM的1-巰基十一烷酸的有機溶液。

4.根據權利要求2所述的利用噴墨打印技術制備梯度蛋白模版的方法，其特征在于：所述噴金硅片的硅片表面由內向外依次為厚度不低于1nm的鉻層和50-200nm厚的金層，金層純度不小于99.99％。

5.根據權利要求2所述的利用噴墨打印技術制備梯度蛋白模版的方法，其特征在于：所述反浸液為濃度為0.25-2mM的11-巰基-1-十一醇的有機溶液，所述EDC/NHS體系pH為5.5，體系中所含組分及相應組分在體系中的濃度分別為醋酸緩沖液0.2-1M、碳化二亞胺2-10mg/mL和N-羥基琥珀酰亞胺2-10mg/mL。

6.根據權利要求2所述的利用噴墨打印技術制備梯度蛋白模版的方法，其特征在于：步驟e所述的偶聯通過如下步驟實現：

①將活化所得的基材浸入0-20℃的蛋白溶液中浸泡1-36小時，基材上未反應的位點以0.05-2mg/mL白蛋白溶液封閉，所述蛋白溶液中所含組分及相應組份在溶液中的濃度分別為：Na₂HPO₄?10mM、NaCl?138mM、KCl?2.7mM、KH₂PO₄1.76mM和蛋白5-50μg/mL，所述蛋白為層粘蛋白、膠原蛋白和纖粘蛋白中的至少一種；

②水洗步驟①所得基材，然后用濃度為0.5-2M?NaOH溶液震蕩沖洗5-30min，最后再于pH7.4的磷酸鹽緩沖液中浸泡5-30min，最后得梯度蛋白模版。

7.根據權利要求1至6任一權利要求所述的利用噴墨打印技術制備梯度蛋白模版的方法，其特征在于：

步驟a中所述容器為兩個，所述噴射液為0.25-2mM的1-巰基十一烷酸的乙醇溶液；

步驟b所述線性優化灰度區間的設計方法為：利用Photoshop或PowerPoint軟件設計0-255區間的灰度值，以飽和端-COOH基硫醇的乙醇溶液為噴射液、從0-255灰度值中篩選不同灰度值并以所篩選的灰度值為基準打印圖案，以所得圖案作為標準圖案分別測量相應灰度圖案的靜態接觸角，依據灰度值與靜態接觸角的關系作曲線，得線性優化灰度區間；

步驟c所述噴金硅片外表面由內向外依次為厚度不低于1nm的鉻層和50-200nm厚的金層，所述金層純度不小于99.99％；

步驟d所述反浸液為0.25-2mM的11-巰基-1-十一醇的乙醇溶液，所述EDC/NHS體系pH為5.5，體系中所含組分及相應組分在體系中的濃度分別為醋酸緩沖液0.2-1M、碳化二亞胺2-10mg/mL和N-羥基琥珀酰亞胺2-10mg/mL；

步驟e所述將活化所得的基材與目標蛋白進行偶聯的操作方法為：將活化所得基材浸入0-20℃的蛋白溶液中浸泡1-36小時，基材上未反應的位點以0.05-2mg/mL白蛋白溶液封閉，所述蛋白溶液中所含組分及相應組份在溶液中的濃度分別為：Na₂HPO₄?10mM、NaCl?138mM、KCl?2.7mM、KH₂PO₄?1.76mM和蛋白5-50μg/mL，所述蛋白為層粘蛋白、膠原蛋白或纖粘蛋白；然后再水洗與蛋白偶聯后的基材，再用濃度為0.5-2M的NaOH溶液震蕩沖洗5-30min，最后于pH7.4的磷酸鹽緩沖液中浸泡5-30min，最后得梯度蛋白模版。