[發(fā)明專利]多色量子點組合微球編碼的液體芯片及其制備方法和檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910191281.2
• 申請日: 2009-10-30
• 公開（公告）號: CN101812506A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅陽;王玨;府偉靈
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.多色量子點組合微球編碼的液體芯片，其特征在于：由通用引物和四種 核酸檢測系統(tǒng)組成，每種核酸檢測系統(tǒng)由多色量子點組合微球標記的探針P1和 磁性微球標記的探針P2組成；所述通用引物的序列如SEQ?ID?No.1～3所示；所 述四種核酸檢測系統(tǒng)分別為金黃色葡萄球菌核酸檢測系統(tǒng)、綠膿桿菌核酸檢測 系統(tǒng)、破傷風梭狀芽孢桿菌核酸檢測系統(tǒng)和產(chǎn)氣莢膜梭菌核酸檢測系統(tǒng)，其中 金黃色葡萄球菌核酸檢測系統(tǒng)的探針P1和P2序列分別如SEQ?ID?No.4和SEQ? ID?No.5所示，綠膿桿菌核酸檢測系統(tǒng)的探針P1和P2序列分別如SEQ?ID?No.6 和SEQ?ID?No.7所示，破傷風梭狀芽孢桿菌核酸檢測系統(tǒng)的探針P1和P2序列 分別如SEQ?ID?No.8和SEQ?ID?No.9所示，產(chǎn)氣莢膜梭菌核酸檢測系統(tǒng)的探針 P1和P2序列分別如SEQ?ID?No.10和SEQ?ID?No.11所示；所述多色量子點組合 微球由球體和裝載在球體中的多色量子點組合物組成，四種核酸檢測系統(tǒng)分別 用四種球體粒徑相同但熒光發(fā)射波長不同的多色量子點組合微球標記探針P1， 所述四種球體粒徑相同但熒光發(fā)射波長不同的多色量子點組合微球分別為裝載 熒光發(fā)射波長為560nm的CdTe量子點的微球、裝載熒光發(fā)射波長為620nm的 CdTe量子點的微球、裝載熒光發(fā)射波長為650nm的CdTe量子點的微球和裝載 熒光發(fā)射波長為560nm和620nm的CdTe量子點的微球。

2.權(quán)利要求1所述的多色量子點組合微球編碼的液體芯片的制備方法，其 特征在于：包括以下步驟：

a、針對細菌16S?rDNA的保守序列設(shè)計并合成如SEQ?ID?No.1～3所示的通 用引物；

b、制備四種核酸檢測系統(tǒng)：按照步驟b1～b3制備每種核酸檢測系統(tǒng)，不同 核酸檢測系統(tǒng)分別用球體粒徑相同但熒光發(fā)射波長不同的多色量子點組合微球 標記探針P1；

b1、根據(jù)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、破傷風梭狀芽孢桿菌或產(chǎn)氣莢膜梭 菌的特異性基因序列設(shè)計并合成分別與靶核酸序列兩端互補的探針P1和P2，P1 和P2之間不互補，并將探針P1和P2的一端分別用生物素標記；金黃色葡萄球 菌核酸檢測系統(tǒng)的探針P1和P2序列分別如SEQ?ID?No.4和SEQ?ID?No.5所示， 綠膿桿菌核酸檢測系統(tǒng)的探針P1和P2序列分別如SEQ?ID?No.6和SEQ?ID?No.7 所示，破傷風梭狀芽孢桿菌核酸檢測系統(tǒng)的探針P1和P2序列分別如SEQ?ID? No.8和SEQ?ID?No.9所示，產(chǎn)氣莢膜梭菌核酸檢測系統(tǒng)的探針P1和P2序列分 別如SEQ?ID?No.10和SEQ?ID?No.11所示；

b2、制備3種熒光發(fā)射波長分別為560nm、620nm和650nm的CdTe量子 點，制成4種球體粒徑相同但熒光發(fā)射波長不同的多色量子點組合微球，分別 為裝載熒光發(fā)射波長為560nm的CdTe量子點的微球、裝載熒光發(fā)射波長為 620nm的CdTe量子點的微球、裝載熒光發(fā)射波長為650nm的CdTe量子點的微 球和裝載熒光發(fā)射波長為560nm和620nm的CdTe量子點的微球；將多色量子 點組合微球用鏈霉親和素標記后，與步驟b1所得生物素標記的探針P1通過生 物素與鏈霉親和素的特異性結(jié)合進行偶聯(lián)，制得多色量子點組合微球標記的探 針P1；

b3、將磁性微球用鏈霉親和素標記后，與步驟b1所得生物素標記的探針P2 通過生物素與鏈霉親和素的特異性結(jié)合進行偶聯(lián)，制得磁性微球標記的探針P2。