[發(fā)明專利]一種利用基因的協(xié)同作用培育抗黃萎病棉花的方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910190967.X
• 申請日: 2009-09-24
• 公開（公告）號: CN101717784A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李先碧;裴炎;李德謀;肖月華;羅明;侯磊;宋水清;范艷華;羅小英
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;A01H1/02
• 代理公司: 重慶博凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50212
• 代理人: 張先蕓

1.一種利用基因的協(xié)同作用培育抗黃萎病棉花的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)獲得球孢白僵菌幾丁酶基因Bbchit1和益母草抗菌蛋白基因LjAMP2，并分別構(gòu)建Bbchit1和LjAMP2基因組成型表達的植物表達載體P5-35S-Bbchit1和P5-LjAMP2；其中，所述Bbchit1基因序列如序列1所示，所述LjAMP2基因序列如序列2所示，P5-35S-Bbchit1、P5-LjAMP2和P5的構(gòu)建分別如圖1、圖2和圖3所示；

(2)利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將Bbchit1和LjAMP2基因組成型表達的植物表達載體P5-35S-Bbchit1和P5-LjAMP2分別轉(zhuǎn)入棉花，實現(xiàn)Bbchit1和LjAMP2基因在棉花內(nèi)的組成型表達；

(3)將步驟(2)獲得的轉(zhuǎn)基因棉花進行抗病鑒定和選育，篩選黃萎病病情指數(shù)60-80，植株生長發(fā)育正常的純合株系；

(4)分別以步驟(3)獲得的球孢白僵菌幾丁酶基因Bbchit1和益母草抗菌蛋白基因LjAMP2轉(zhuǎn)基因棉花純合株系為父本和母本進行有性雜交，獲得雜交F₁代，實現(xiàn)球孢白僵菌幾丁酶基因Bbchit1和益母草抗菌蛋白基因LjAMP2在同一植株內(nèi)同時進行組成型表達，利用二者的協(xié)同作用提高棉花對黃萎病的抗病能力。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用基因的協(xié)同作用培育抗黃萎病棉花的方法，其特征在于，所述步驟(3)的純合株系是指以轉(zhuǎn)基因棉花后代中不再出現(xiàn)GUS基因的分離為標(biāo)準(zhǔn)確定純合株系，以病情指數(shù)為60-80為標(biāo)準(zhǔn)確定抗病性的提高程度進行鑒定。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述利用基因的協(xié)同作用培育抗黃萎病棉花的方法，其特征在于，所述的抗病鑒定是指于人工氣候室內(nèi)進行的抗病鑒定，主要是對轉(zhuǎn)基因棉花3-4片真葉幼苗進行傷根后澆灌病原菌孢子液的方法。