[發(fā)明專利]水泡性口炎病毒快速檢測試紙條及其制作方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910190437.5
• 申請日: 2009-09-16
• 公開（公告）號: CN101666800A
• 公開（公告）日: 2010-03-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 花群義;阮周曦;楊俊興;楊云慶;曾少靈;張彩虹;孫潔;呂建強;秦智鋒;陶虹
• 申請（專利權(quán)）人: 花群義
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 深圳市中知專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 成義生;羅永前

1.一種水泡性口炎病毒快速檢測試紙條，其特征在于，該試紙條包括：

基板(1)，它是由不透水材料制成的條形板狀體；

樣品吸收墊(2)，它由多孔纖維制成，該樣品吸收墊內(nèi)吸附有膠體金 標(biāo)記的水泡性口炎病毒的單克隆抗體，該單克隆抗體的制備是將純化的水 泡性口炎病毒免疫BALB／c小鼠三次，然后取免疫小鼠的脾細胞與SP2／0骨 髓瘤細胞融合，并由間接ELISA方法檢測分泌抗VSV的特異性單克隆抗體 的雜交瘤細胞，再由BALB／c小鼠制備單抗腹水；

形成樣品吸收墊(2)的多孔纖維為玻璃纖維；

硝酸纖維膜(3)，其上設(shè)有檢測線(4)和對照線(5)，其中，檢測線 (4)上包被或噴附有水泡性口炎病毒多克隆抗體，對照線(5)上包被或 噴附有蛋白質(zhì)A；

吸水墊(6)，且

所述吸收墊(2)、硝酸纖維膜(3)及吸水墊(6)沿基板(1)的長度 方向依次設(shè)置在基板(1)板面上。

2.如權(quán)利要求1所述的水泡性口炎病毒快速檢測試紙條，其特征在于， 形成基板(1)的不透水材料為聚氯乙烯。

3.如權(quán)利要求1所述的水泡性口炎病毒快速檢測試紙條的制作方法， 其特征在于，該方法包括如下步驟：

a、制備水泡性口炎病毒單克隆抗體，水泡性口炎病毒單克隆抗體的制 備是將純化的水泡性口炎病毒免疫BALB／c小鼠三次，然后取免疫小鼠的脾 細胞與SP2／0骨髓瘤細胞融合，并由間接ELISA方法檢測分泌抗VSV的特 異性單克隆抗體的雜交瘤細胞，再由BALB／c小鼠制備單抗腹水；

b、燒制膠體金，并準(zhǔn)備待標(biāo)記單抗，然后測定膠體金標(biāo)記抗體的最適 穩(wěn)定量；

c、對抗體進行膠體金標(biāo)記，接著對膠體金標(biāo)記抗體進行純化；

d、將純化的膠體金標(biāo)記抗體吸附于多孔纖維樣品吸收墊上；

e、在硝酸纖維膜上形成由水泡性口炎多克隆抗體和蛋白質(zhì)A包被或噴 附的檢測線和對照線；

f、在基板上沿長度方向?qū)⑽接心z體金標(biāo)記單克隆抗體的樣品吸收 墊、包被有檢測線和對照線的硝酸纖維膜和吸水墊依次設(shè)置在基板板面上， 形成檢測試紙條，并將其裝入塑料外殼的檢測卡內(nèi)。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(b)中，膠體金的 燒制和待標(biāo)記單抗的準(zhǔn)備是由檸檬酸鈉還原法燒制直徑20nm～50nm膠體金 顆粒，取-20℃保存的純化好的水泡性口炎病毒的單克隆抗體，將其濃度調(diào) 整為1mg／mL，4℃保存?zhèn)溆茫粚?zhǔn)備好的待標(biāo)記單克隆抗體做系列稀釋為5 μg／mL～90μg／mL，分別取1mL，加入每管1mL分裝好金膠溶液中，以測定 膠體金標(biāo)記抗體的最適穩(wěn)定量。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(c)中，抗體的膠 體金標(biāo)記是將2mg水泡性口炎病毒的單克隆抗體溶于100mL膠體金溶液， 在電磁攪拌器攪拌下，緩慢將單克隆抗體溶液加入膠體金溶液中進行標(biāo)記， 然后進行膠體金標(biāo)記抗體的純化：標(biāo)記好單克隆抗體的膠體金溶液純化后， 于含1％牛血清白蛋白和含0.02％NaN₃的0.02m01／LpH8.2Tris-HCl緩沖 液中重懸為原體積的1／10，4℃保存?zhèn)溆谩?

6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(d)中，將0.02 mol／LpH8.6TBS稀釋金標(biāo)單克隆抗體吸附于玻璃纖維濾紙上，形成吸附有 膠體金標(biāo)記抗體的玻璃纖維。

7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(e)中，在硝酸纖 一維膜上設(shè)定出檢測線和對照線位置，用噴膜機分別在其所在位置噴上 2.5mg／L的水泡性口炎多克隆抗體和蛋白質(zhì)A，形成檢測線和對照線。