[發明專利]一種制備伐普肽的方法

有效

• 申請號: 200910189087.0
• 申請日: 2009-12-18
• 公開（公告）號: CN101712716A
• 公開（公告）日: 2010-05-26
• 發明（設計）人: 肖慶;李紅玲;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳市翰宇藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所 44248
• 代理人: 胡吉科

技術領域

本發明涉及一種制備伐普肽(Vapreotide)的合成工藝。

背景技術

本品所含伐普肽，其分子結構式為：D-苯丙酰-L-半胱酰-L-酪氨酰- D-色氨酰-L-賴氨酰-L-纈氨酰-L-半胱酰-L-色氨酰胺(2-7二硫鍵)，是 一個高效的生長激素釋放抑制因子14肽的8肽同系物。體外實驗表明， 本品能明顯抑制胰腺的分泌，其作用強度比天然的生長激素釋放抑制因子 更強，持續時間也更長。用實驗犬進行的研究表明，本品對胰腺的作用與 人工制備的生長激素釋放抑制因子14肽(SS14)和阿托品相似，但抑制碳 酸氫根(HCO₃-)分泌的作用是SS14的2～4倍，在較低劑量下即可抑制 蛋白酶的分泌，作用持續的時間也比SS14長。伐普肽是第一種表現出治 療急性靜脈曲張破裂出血作用的生長抑素類似物，能產生特異性的器官血 管收縮作用，這種作用能有效地用于急性胃腸道出血的止血，目前還在進 行包括治療前列腺癌、肢端肥大癥等疾病的三期臨床實驗。

目前國內還沒有關于伐普肽合成工藝方法的報道；國外雖然有關于伐 普肽合成工藝的報道，也多是液相合成工藝，操作復雜，不利于工業生 產、應用價值不高。

發明內容

本發明提出了一條較適當的路線，使用固相法合成線性伐普肽，且通 過固相氧化得到伐普肽，且操作方便、收率較高。

為實現上述目的，本發明采取以下技術方案：一種制備伐普肽的方 法，包括以下步驟：

1)由Fmoc-Trp(Boc)-OH和Rink?Amide?Resin出發，得到Fmoc- Trp(Boc)-Rink?Amide?Resin；

2)將Fmoc-Trp(Boc)-Rink?Amide?Resin采用固相合成法按肽序偶 聯得到線性伐普肽-Rink?Amide?Resin；

3)采用固相氧化伐普肽-Rink?Amide?Resin；

4)裂解伐普肽-Rink?Amide?Resin，純化、凍干得到伐普肽。

其中，Rink?Amide?Resin即為Rink?Amide樹脂，其替代度優選為 0.3mmol/g-0.8mmol/g。所述固相合成法采用的偶聯劑包括DIC/HOBt、 PyBOP/HOBt或TBTU/HOBt，優選DIC/HOBt，其中“/”表示“和”的含 義。

實驗發現，本發明的偶聯劑能夠明顯提高反應速率，同時DIC/HOBt偶 聯體系極大的降低生產成本。

所述氧化伐普肽-Rink?Amide?Resin是由線性伐普肽-Rink?Amide Resin經過碘固相氧化得到。碘的用量是伐普肽摩爾量的10-80倍，優 選20倍。

傳統的線性肽氧化采用液相氧化，本發明采用了碘的固相氧化。本發 明直接簡化了生產工藝，提高了工藝的可操作性。碘的用量尤其重要，用 量過少使氧化反應不能完全徹底，用量過多造成多聚物的產生，直接影響 反應收率并給純化帶來困難，本發明碘的用量是伐普肽摩爾量的10-80 倍克服了以上困難，尤其采用20倍投料量可大幅度的提高了氧化收率。

固相氧化采用碘為氧化劑，反應溶劑為N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲 烷，優選N，N-二甲基甲酰胺。

固相氧化采用碘為氧化劑，反應時間在8-12小時，優選10小時。

實驗發現，在氧化時間小于8小時，線性肽還有大量未氧化成環肽，而 氧化時間大于12小時，則發現部分線性肽之間成環，形成聚合物。本發明 的氧化時間選擇10小時，粗肽純度大于85％。

固相氧化采用碘為氧化劑，反應溫度在10℃-40℃。優選35℃。

實驗發現反應溫度低于10℃時，氧化反應收率不及50％，而反應溫度大 于40℃時，發現氨基酸極易發生消旋，產生難以分離的雜質肽。本發明的 氧化反應溫度為35℃時，在減少了氨基酸消旋的情況下，提高了氧化收率 及反應速率。