[發明專利]一種提高花葉艷山姜組培繁殖速度的方法

無效

• 申請號: 200910188527.0
• 申請日: 2009-12-01
• 公開（公告）號: CN101785428A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 陳春滿;張善信;陳青云
• 申請（專利權）人: 東莞市生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 東莞市冠誠知識產權代理有限公司 44272
• 代理人: 覃業軍

1.一種提高花葉艷山姜組培繁殖速度的方法，包括如下步驟：A.采種選擇在連續晴 天7～8天后進行，在制種前2～3天從土壤中成叢挖出需要作種的花葉艷山姜植株，清除泥 土，并于室內通風陰涼的地方倒掛著晾干2～3天；B.選擇塊莖上的側芽或已抽生的嫩芽 作為外植體材料；C.誘導不定芽產生；D.不定芽增殖培養；E.不定芽生根培養；F.小 苗移栽；

其特征在于：

對于“C.誘導不定芽產生”的步驟是：

(1)消毒方法：去除塊莖上過長的葉片及根系后，在自來水下沖洗干凈泥土，并將用 作外植體材料的嫩芽與老莖切割開，并用濕脫脂棉花蘸按重量計的0.5％的洗衣粉水輕擦用 作外植體材料的嫩芽和塊莖的表面，再在自來水下沖洗10～20分鐘；在潔凈工作臺上，去 除用作外植體材料的嫩芽上多余的葉片及外苞葉；將塊莖上用作外植體材料的側芽中的大 的側芽切下，小的側芽留在塊莖上，保持每塊外植體材料大小為1～2cm×1～2cm大小； 按照用作外植體材料的嫩芽、用作外植體材料的側芽中的大的側芽及用作外植體材料的側 芽中的小的側芽三種不同類型分置于不同的干凈瓶子中，每瓶3～4個塊材料；用75％酒精 浸泡30s后，用無菌水沖洗一次，再注入0.1％升汞溶液進行浸泡消毒20～25分鐘，外植 體材料小的消毒時間為20分鐘，外植體材料大的消毒時間為25分鐘，并不斷搖動；然后 將外植體材料取出，在無菌水中漂洗5～6次，每次5～6分鐘；后浸入無菌水中備用；

(2)將消毒好的外植體材料切去外苞葉及周圍多余的組織，留下包含生長點的莖尖或 側芽，保持外植體大小為1～1.5cm×1～1.5cm；

(3)將經過上述(2)處理的外植體材料轉入初代誘導芽形成的誘導芽培養基上，每 瓶1個芽，培養容器為250ml的廣口玻璃瓶；所述誘導芽培養基為：MS+6-BA 4.0～5.0mg·L^-1+KT5.0mg·L^-1+NaH₂PO₄170mg·L^-1+白糖3％+瓊脂0.6％，pH5.8～6.0； 6-BA即6-芐氨基嘌呤；KT即6-糠氨基嘌呤；

(4)培養條件為：光照強度12.5～19μmol·m^-2·s^-1，溫度27～28℃，培養周期30～40 天；

(5)當外植體材料開始啟動時，外植體材料上的側芽開始萌發并伸長；30～40天后， 可產生0.5～2cm長的芽體；這時將外植體材料取出，于潔凈工作臺上進行切割處理；切割 方法如下：切除材料上褐化的組織塊，去除芽體多余的葉片，保持1～2cm的團塊大小； 如果新抽生的芽體基部粗度大于0.5cm時，用刀尖從上往下切割并刺破到生長點位置，但 不使芽體分離；然后轉入同種培養基中，繼代繁殖3～4次，培養周期為30～40天；切割 方法均如上所述；培養容器為250ml的廣口玻璃瓶，每瓶1～6團塊，盡量做到不交叉放置， 直到作為培養體的團塊的基部長出2～4個不定芽，待不定芽生長和增殖較穩定時，轉入增 殖培養基中進行增殖培養；

對于“D.不定芽增殖培養”的步驟是：

(1)將已長出不定芽的團塊按生長方向進行增殖切割，每個團塊保留2～3個不定芽， 并切除過長的葉片，接入增殖培養基中；每瓶接種15個團塊；團塊中不定芽如果有白化 的或全綠的單株則將其切除丟棄，如果不定芽基部粗度大于0.5cm時用刀尖從上往下切割 并刺破到生長點位置，但不使芽體分離；

(2)培養容器為500ml的透明三角玻璃瓶；

(3)增殖培養基為：MS+MgSO₄·7H₂O1180mg·L^-1+NaH₂PO₄170mg·L^-1+ Ca(NO₃)₂·4H₂O440mg·L^-1+6-BA2～3mg·L^-1+KT3～5mg·L^-1+白糖3％+瓊脂0.6％， 6-BA即6-芐氨基嘌呤；

(4)培養條件為：光照強度38～50μmol·m^-2·s^-1，溫度為22～24℃；培養周期40～45 天；繼代培養10～11代；

對于“E.不定芽生根培養”的步驟是：

(1)進行生根切割，從所述不定芽的芽叢中切下生長正常的、葉面帶有花斑的、高 2～3cm的實心芽，接種到生根培養基上；達不到生根標準的培養團塊則按生長方向進行增 殖切割，每個團塊保留2～3個不定芽，并將團塊芽放入所述的增殖培養基中進行增殖培養； 此時也要剔除白化的或全綠的單株；

(2)生根培養容器為：14.5cm×13cm耐高溫塑料袋或250ml玻璃瓶，每瓶或每袋接 10株；

(3)生根培養基為：1/2MS+NAA0.5mg·L^-1+白糖3％+瓊脂0.6％，pH5.8～6.0，1/2MS 即NH₄NO₃、KNO₄、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄用量減少為MS-培養基正常用量的1/2，其 它元素的用量不變；NAA即α-萘乙酸；

(4)培養條件：光照強度38～50μmol·m^-2·s^-1，溫度為26～28℃，培養周期20～35 天；

對于“F.小苗移栽”的步驟是：

(1)當所述不定芽即小苗在生根培養基上生長20～35天時，即開始有小根長出；此時 將高3～5cm、帶有2～4片葉及具根的達標植株移栽到溫室大棚中進行馴化栽培；移栽時洗 凈附著在根上的培養基，以減少斷根斷葉現象；并用800倍百菌清或輪多克浸泡5分鐘后 栽種于128目篩盤上；

(2)栽培基質為泥炭土與珍珠巖混合基質，比例3∶1；

(3)保持溫度為20～30℃，夏季移栽后用薄膜覆蓋兩周，冬季薄膜覆蓋三周，每天噴 霧處理，控制濕度為85～95％；早晚打開薄膜底部和兩端，以利于通風透氣；夏天中午當薄 膜內溫度超過32℃時，也將薄膜底部和兩端打開，以降低溫度和通風；移栽后1個月內， 控制光照強度在50μmol·m^-2·s^-1以下，待生長穩定后，光照強度增加到100～125μmol· m^-2·s^-1。