[發明專利]一種制備尿激酶的方法

有效

• 申請號: 200910186618.0
• 申請日: 2009-12-07
• 公開（公告）號: CN101701215A
• 公開（公告）日: 2010-05-05
• 發明（設計）人: 張志武;劉蘭花;曾英;朱月華;楊益輝
• 申請（專利權）人: 南昌市萬華生化藥業有限公司
• 主分類號: C12N9/72
• 分類號: C12N9/72
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種制備尿激酶的方法，其特征在于該方法依次包括如下步驟：

(1)取一定量的尿激酶粗品，用8～10倍尿激酶粗品量(體積與重量比)的pH6.0，0.1mol/L磷酸緩沖液分2～3次加入溶解，每次攪拌溶解0.5～1.0小時，然后離心或過濾，合并上清或濾液，體積較大時進行超濾濃縮，得到的澄清溶液備用；

(2)將步驟(1)得到的澄清溶液調節電導率，使其與D160陽離子樹脂層析柱使用的平衡液電導率一致，再上用含0.15～0.30mol/L氯化鈉的pH6.0，0.1mol/L磷酸緩沖液平衡的D160陽離子樹脂層析柱，然后用含0.15～0.30mol/L氯化鈉的pH6.0，0.1mol/L磷酸緩沖液洗滌；最后用pH10，1～3％氨水進行洗脫，收集洗脫活性峰；

(3)將步驟(2)收集得到的洗脫活性峰用醋酸調pH7.2，然后上對氨基苯甲脒聚砜凝膠純化柱，用含0.45～0.60mol/L氯化鈉的pH7.2，0.1mol/L磷酸緩沖液洗滌，再用含0.25～0.35mol/L氯化鈉的pH3.5～4.5，0.1mol/L醋酸緩沖液洗脫，收集洗脫活性峰；

(4)將步驟(3)收集得到的洗脫活性峰用醋酸調pH7.2，然后上對氨基苯甲脒瓊脂糖凝膠層析柱，用含1.0～2.0mol/L氯化鈉的pH7.2，0.1mol/L磷酸緩沖液洗滌，再用含0.35～0.45mol/L氯化鈉的pH3.5～4.5，0.1mol/L醋酸緩沖液洗脫，收集洗脫活性峰，過濾，最后進行冷凍干燥，得到尿激酶。