[發明專利]一種淫羊藿苷元的制備方法

有效

• 申請號: 200910184282.4
• 申請日: 2009-08-18
• 公開（公告）號: CN101760487A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發明（設計）人: 賈曉斌;賈東升;孫娥
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫藥研究院
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 黃嘉棟

技術領域：

本發明屬于天然藥物領域，涉及淫羊藿苷元的制備方法。

背景技術：

淫羊藿始載于《神農本草經》，具有補腎壯陽、祛風除濕、強筋健骨等作用，臨床上用 于治療多種原因所致的骨質疏松癥。實驗表明淫羊藿黃酮組分是其抗骨質疏松的有效部位， 其中有效成分淫羊藿苷元作用最為明顯，在體外具有促進成骨細胞活性，抑制破骨細胞活性 的作用，因此制備淫羊藿苷元對研制抗骨質疏松新藥有巨大的價值。

淫羊藿苷元，全稱3，5，7-三羥基-4′-甲氧基-8-異戊烯基黃酮，又名淫羊藿素，英文名 為Icaritin，是一類多羥基黃酮類化合物，具有抗骨質疏松、抗氧化及激素樣生物活性。其結 構式如下：

淫羊藿黃酮類成分在植物淫羊藿中多以苷類化合物形式存在，而淫羊藿苷元在原植物中 含量很低，難以直接分離純化得到，因此可以通過水解淫羊藿黃酮苷類化合物中糖苷鍵的方 法制備淫羊藿苷元。已報道的水解糖苷鍵的方法有：(1)化學方法，如酸、堿水解法。酸水 解法多用鹽酸、硫酸或硝酸，堿水解法多用氫氧化鈉或氫氧化鉀。此法多采用水解淫羊藿苷 3-鼠李糖糖苷鍵和7-葡萄糖糖苷鍵從而獲得淫羊藿苷元，這些研究以淫羊藿苷為反應底物， 由于淫羊藿苷本身成本較高，其制備方法難以推廣，且化學方法反應條件劇烈，容易破壞產 物，往往得不到完整的苷元，另外化學方法對環境污染大，不適合工業化大生產。(公開號： CN?101200743A水合淫羊藿素的制備方法；公開號：CN?1919191A環淫羊藿苷元作為制備防 治器官移植排斥反應藥物的應用；公開號：CN?101316573A一種含有淫羊藿苷的水解產物 的化妝品組合物)。(2)生物轉化法，如以淫羊藿為細菌、霉菌、酵母菌的發酵產酶誘導物， 制備含霉菌液，再用此菌液將淫羊藿黃酮苷類化合物轉化為低糖苷或苷元(公開號：CN 1473938A酶法水解淫羊藿甙糖基制備低糖淫羊藿甙或甙元的方法)，由于淫羊藿黃酮苷類化 合物種類很多，其糖苷鍵結構十分復雜，主要由α-L-鼠李糖糖苷鍵、β-D-葡萄糖糖苷鍵、 β-D-木糖糖苷鍵等單糖糖苷鍵以及由他們組成的二糖糖苷鍵構成，加上酶催化水解的高度專 一性，這些含酶菌液無法徹底將糖苷鍵脫去，因此無法得到純度較高的淫羊藿苷元。另外， 此法操作復雜，耗時多，目的性不強，多得到低糖苷，難以得到苷元，且轉化率低，分離純 化難，不利于工業化生產。

蝸牛酶是從蝸牛的嗉囊和消化道中提取的一種很有價值的混合酶，目前已明確其含有纖 維素酶、果膠酶、淀粉酶、蛋白酶等20多種酶，具有很強的生物轉化能力，已廣泛用于飼料 加工業、食品加工業以及細胞生物學和基因工程學的研究。針對淫羊藿黃酮苷類化合物中糖 苷鍵的復雜性，以及蝸牛酶的特殊性，本發明成功地將蝸牛酶應用于水解糖苷鍵制備淫羊藿 苷元，利用蝸牛酶的強酶解力，可直接將淫羊藿黃酮苷類化合物轉化為苷元，簡化了操作步 驟，此方法具有目地性強、轉化率高、無污染、可大規模生產的優點。目前未見用蝸牛酶制 備淫羊藿苷元的報道。

發明內容

本發明提供了一種淫羊藿苷元的制備方法。

本發明技術方案如下：

一種淫羊藿苷元的制備方法，其特征是它包括下列步驟：

步驟1、將干燥的淫羊藿粉碎或切段，加入濃度為30-95％的乙醇或30-100％甲醇回流提 取，提取液減壓濃縮得膏狀物；

步驟2、在步驟1所得的膏狀物以每克加入10-100毫升的比例加入pH＝3.5-9.0的醋酸- 醋酸鈉緩沖液，按酶/膏狀物＝0.05～5的質量比加入蝸牛酶進行水解，反應的溫度為15-80℃， 反應時間為2-72h；

步驟3、將反應液離心，取沉淀用有機溶劑溶解，過濾取濾液，蒸去溶劑，即得淫羊藿 苷元粗品。

上述的制備方法，步驟1中所述的回流提取可以是兩次回流提取，第一次加入8-20倍淫 羊藿質量的溶劑回流提取，第二次加入6-15倍淫羊藿質量的溶劑回流提取，合并兩次提取液， 減壓濃縮。

上述的制備方法，步驟2中所述的醋酸-醋酸鈉緩沖液，可用Tris-HCl緩沖液、醋酸-醋 酸鉀緩沖液、醋酸-醋酸銨緩沖液、磷酸-三乙胺或磷酸鹽緩沖液代替。

上述的制備方法，步驟3中所述的有機溶劑可以是乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯 甲烷或氯仿。