[發明專利]防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌及其微生物有機肥料

有效

• 申請號: 200910183361.3
• 申請日: 2009-09-18
• 公開（公告）號: CN101659934A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發明（設計）人: 沈其榮;何欣;黃啟為;楊興明;沈標
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01P3/00;C05F11/08;C05F17/00;C12R1/125
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一、技術領域

本發明涉及用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌及其微生物有機肥料，屬于農業集約化生產技術領域。

二、背景技術

自2001年在我國第一次發現連作香蕉巴拿馬枯萎病后，該土傳連作病害迅速蔓延，目前在我國香蕉主要生產區(海南省、廣東省、廣西壯族自治區)越來越嚴重，正在成為香蕉生產的瓶頸。連作香蕉巴拿馬枯萎病是由病原真菌(尖孢鐮刀菌第4小種)引起的，在連作4茬時就開始出現，連作6茬以后越發嚴重。如果沒有防治該病害的方法與途徑，再過5-10年中國就難以生產香蕉，這對中國的香蕉業和人民的生活將產生很大影響。我們的研究結果表明，連作作物枯萎病的關鍵問題不是養分缺乏或不平衡，也不是土壤次生鹽漬化問題，而是土壤中的微生物區系及其次生物質的致毒問題。

另一方面，水稻、小麥、玉米、油菜等作物秸稈就地焚燒、規模化養殖后的畜禽糞便隨地棄置等不僅嚴重污染了環境，也極大地浪費了能作為有機肥和生物有機肥產品的原料；大量的養分資源(C、N、P、K、S及微量元素)流失于土壤-植物系統之外，明顯地削弱了我國農業可持續發展的能力。如何將從土壤中因作物收獲而取走的營養元素最大限度地歸還到土壤中去，唯一的途徑就是將這些固體有機廢棄物制成商品有機肥料再施入土壤。如果將這些固體有機廢棄物經過高溫發酵合成高品位的有機堆肥，再用于功能菌的載體，所制成的微生物有機肥料功能明確，將會有很好的應用前景。

三、發明內容

1.技術問題

本發明的目的在于提供用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌及其微生物有機肥料，防效高，并且有增產功能，使香蕉連作障礙土壤得到生物修復，確保集約化農業的順利發展。

2.技術方案

用于防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌NJN-6和NJN-11，均屬枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)，2009年7月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，NJN-6菌種保藏號為CGMCC?NO.3183，NJN-11的菌種保藏號為CGMCCNO.3184；

NJN-6菌株的主要生物學特性為革蘭氏染色陽性G⁺，細胞為桿狀，端生芽孢，兼性厭氧生長，接觸酶陽性、氧化酶陰性、V.P.反應陽性，甲基紅試驗陰性，發酵葡萄糖產酸不產氣，發酵果糖產酸產氣，不發酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇，可以利用檸檬酸鹽，硝酸還原酶陽性，淀粉水解陽性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性；

NJN-11菌株的主要生物學特性為革蘭氏染色陽性G⁺，細胞為桿狀，端生芽孢，兼性厭氧生長，接觸酶陽性、氧化酶陰性、V.P.反應陽性，甲基紅試驗陽性，發酵葡萄糖、果糖產酸不產氣，不發酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇，可以利用檸檬酸鹽，硝酸還原酶陽性，淀粉水解陽性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性。

用上述防除連作香蕉巴拿馬枯萎病的拮抗菌所生產的微生物有機肥料，該微生物有機肥料中含有1×10⁸個/g以上的NJN-6和1×10⁸個/g以上的NJN-11、全氮含量質量比為4～5％，全氮中質量比90％以上為有機氮，總氮磷鉀養分質量比為6～10％、有機質含量質量比為30～35％。

所述微生物有機肥料的生產方法，其特征為：

(1)將權利要求1所述的拮抗菌NJN-6和NJN-11，分別進行液體發酵生產，其發酵生產的條件為：培養液為PDA，pH6.0～7.0，發酵溫度范圍30～35℃，攪拌速度為180～300轉/分鐘，發酵時間為48hr.，發酵液的含菌或芽孢量≥1×10¹⁰個/ml；所用PDA培養液配制方法為(以配制1L培養基為例)：用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min，接著用四層醫用紗布過濾，濾液加20g普通蔗糖，定容至1000ml，pH值調至7.2-7.4，121℃滅菌20min。

(2)分別將NJN-6和NJN-11發酵液按50L/噸的量接種到腐熟的豬糞堆肥和菜粕的微生物分解混合物中進行固體發酵，發酵過程中每天翻堆1次，溫度不超過50℃，發酵5天，發酵結束后拮抗菌NJN-6和NJN-11含量均達到1×10⁸個/g以上，獲得拮抗菌NJN-6的豬糞堆肥固體菌劑、菜粕的微生物分解混合物固體菌劑和NJN-11的兩種固體菌劑。所用腐熟的豬糞堆肥發芽指數為98％以上，有機質含量≥35％，有機氮含量為1.2-2％，含水量25-30％。