[發明專利]一種檢測牛型結核分枝桿菌抗體的免疫層析試紙及其制備方法

無效

• 申請號: 200910177452.6
• 申請日: 2009-09-29
• 公開（公告）號: CN101692089A
• 公開（公告）日: 2010-04-07
• 發明（設計）人: 端青;趙海;朱虹;何君;檀華;李巖偉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
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1.一種檢測牛型結核分枝桿菌抗體的免疫層析試紙，包括樣品墊、緊密連接于所述樣品墊一端的含有金黃色葡萄球菌蛋白A標記膠體金探針的金標墊、與所述金標墊的另一端緊密連接的硝酸纖維膜和緊密連接于所述硝酸纖維膜另一端的吸水墊；所述硝酸纖維膜包被有相互分離的檢測線和質控線，所述檢測線含有結核分枝桿菌抗原，所述質控線含有能與所述金黃色葡萄球菌蛋白A特異結合的抗體。

2.根據權利要求1所述的檢測牛型結核分枝桿菌抗體的免疫層析試紙，其特征在于：所述檢測包被抗原來自本發明的發明人對牛型結核分枝桿菌MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四種蛋白進行的分別克隆表達，優選為MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四種蛋白的混合配比抗原；所述金黃色葡萄球菌蛋白A特異性抗體為以金黃色葡萄球菌蛋白A為抗原免疫動物得到的抗體，所述免疫動物的選擇是多種多樣的，如羊、兔、猴、雞或鼠等常用的免疫動物；所述檢測線含有MPB70的濃度為1-3mg/mL、MPB83的濃度為1-3mg/mL、ESXA和ESXB的濃度為1-3mg/mL，其中ESXA和ESXB的抗原比例為1∶1-1∶1.8，所述質控線含有的能與金黃色葡萄球菌蛋白A特異結合的抗體的濃度可為3-5mg/mL。

3.根據權利要求2所述的檢測牛型結核分枝桿菌抗體的免疫層析試紙，其特征在于：所述結核分枝桿菌抗原為MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四種蛋白的混合配比抗原

4.根據權利要求1所述的檢測牛型結核分枝桿菌抗體的免疫層析試紙，其特征在于：所述檢測牛型結核分枝桿菌抗體的免疫層析試紙的背面緊密連接一背板。

5.一種制備權利要求1所述的檢測牛型結核分枝桿菌抗體的免疫層析試紙的方法，包括以下步驟：

A.制備牛型結核分枝桿菌抗原，將結核分枝桿菌抗原溶液噴到纖維素膜上形成檢測線，將能與金黃色葡萄球菌蛋白A特異結合的抗體溶液噴到所述纖維膜的另一區域形成質控線，然后將吸水墊粘貼在所述纖維素膜的遠離所述測試帶的一端；

B.制備金黃色葡萄球菌蛋白A標記的免疫膠體金探針溶液，將玻璃纖維膜或聚脂膜浸入該免疫膠體金探針溶液，得到金標墊，將其粘貼在步驟1)得到的纖維素膜的靠近所述檢測線的一端；

C.將在步驟2)中得到的金標墊上遠離所述檢測線的一端粘貼樣品墊，得到檢測牛型結核分枝桿菌抗體的免疫層析試紙。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述步驟1)所述檢測包被抗原來自本發明的發明人對牛型結核分枝桿菌MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四種蛋白進行的分別克隆表達，優選為MPB70、MPB83、ESXA和ESXB四種蛋白的混合配比抗原；所述金黃色葡萄球菌蛋白A特異性抗體為以金黃色葡萄球菌蛋白A為抗原免疫動物得到的抗體，所述免疫動物的選擇是多種多樣的，如羊、兔、猴、雞或鼠等常用的免疫動物；所述檢測線含有MPB70的濃度為1-3mg/mL、MPB83的濃度為1-3mg/mL、ESXA和ESXB的濃度為1-3mg/mL，其中ESXA和ESXB的抗原比例為1∶1-1∶1.8，所述質控線含有的能與金黃色葡萄球菌蛋白A特異結合的抗體的濃度可為3-5mg/mL。