[發明專利]臍帶華通膠來源的間充質干細胞在心力衰竭細胞移植治療中的應用

有效

• 申請號: 200910170248.1
• 申請日: 2009-09-09
• 公開（公告）號: CN101690731A
• 公開（公告）日: 2010-04-07
• 發明（設計）人: 高連如;張寧坤;陳宇;楊曄;丁青艾;朱智明;曹毅
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍總醫院
• 主分類號: A61K35/12
• 分類號: A61K35/12;A61P9/04;C12N5/08
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所 11039
• 代理人: 周自清

技術領域

本發明涉及生物材料在醫療領域的用途，特別涉及以人臍帶華通膠為原料制備的間充質干細胞，在制備因冠心病及擴張性心肌病引起的心力衰竭細胞移植材料方面的應用。?

背景技術

全球每年有約1700萬人死于心血管疾病。雖然隨著藥物治療、介入技術和外科手術水平的提高，急性心肌梗死的病死率明顯下降，但循證醫學發現，即使早期成功接受再血管化治療的急性心肌梗死患者中，仍有超過30％的患者發展為缺血性心力衰竭，甚至進一步發展為終末期缺血性心力衰竭。終末期缺血性心力衰竭是指：①有心肌梗死史；②有嚴重心力衰竭臨床表現并反復住院；③強化內科藥物治療無效；④無內科介入及外科搭橋手術指征；⑤左心室射血分數(LVEF)小于40％。終末期缺血性心力衰竭年死亡率在60％以上。對終末期缺血性心力衰竭所能采取的治療手段僅有兩項：①心臟移植；②安裝心室輔助裝置。心臟移植因為手術耐受、供體、免疫排斥等原因不可能廣泛使用；安裝心室輔助裝置則僅適用于短期支持過渡期嚴重血液動力學障礙急性患者，不能長期維持應用。因此，當前國際醫學界尚無有效方法逆轉終末期缺血性心力衰竭患者的病情。?

除缺血性心臟病所致的心力衰竭，擴張性心肌病是慢性心力衰竭又一常見原因，其中包括病因不清的特發性心肌病和繼發于心肌炎后的心肌病。擴張性心肌病引起的慢性心力衰竭1年病死率約25-30％，心臟移植是唯一有效治療措施。由于受供體來源和技術的限制，全球心臟移植每年只有三千余例，中國僅數十例。?

當代細胞生物學的發展給這些慢性心力衰竭患者帶來了新的希望。臨床研究發現，自體骨髓單個核細胞、自體骨髓間充質干細胞，以及內皮祖細胞、骨髓側群細胞等成體干細胞移植治療缺血性心力衰竭、陳舊性心肌梗死及心肌梗死后心衰，可以不同程度改善心臟收縮和舒張功能、阻止左室重構、改善預后。?

然而，細胞療法在臨床應用中遇到了來自種子細胞的重重障礙：應用胚胎干細胞存在倫理、法律、免疫排斥及致腫瘤性等問題；應用自體成體干細胞遇到更多問題，諸如①骨髂肌成肌細胞移植存在嚴重致心律失常性；②骨髓單個核細胞移植成分復雜，所含具有多向分化潛能的干細胞數量低，分化潛能有限；③造血干細胞CD34不能分化為心肌細胞表型；④CD133細胞移植可致冠脈支架再狹窄；⑤內皮祖細胞改善心功能作用有限；⑥骨髓間充質干細胞(MSCs)材料來源受限，細胞增殖分化潛能隨年齡的增長而明顯下降，尤其是冠心病患者MSCs增殖分化能力明顯低于同齡健康人，體外長時間擴增降低體內分化歸巢潛能；⑦與自體MSCs相比，臍血MSCs有諸多優點，但臍血源MSCs分離效率低，限制了其廣泛應用。總之，當前尚無一種理想的種子細胞滿足對這些慢性心力衰竭患者實施細胞生物學治療的臨床需求，需要突破的技術瓶頸是解決多能干細胞的來源。?

本發明人的在先專利申請“200910157731.6臍帶華通膠間充質干細胞的制備方法及其產品”為心力衰竭患者實施細胞生物學治療提供了新的物質基礎。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是，將臍帶華通膠來源的間充質干細胞應用于因冠心病及擴張性心肌病引起的慢性心力衰竭患者，作為對其實施細胞移植治療的材料，用以改善以上這些慢性心力衰竭患者的生存質量，降低死亡率；同時克服冠心病及老年患者自體干細胞分化增殖及旁/自分泌功能減低不能達到有效的生物學效應的缺陷。?

本發明所稱“臍帶華通膠來源的間充質干細胞”，英文名稱為“UmbilicalCord?Wharton’s?Jelly-Derived?MSCs，UW-MSCs”，是按以下方法制備的：?

取人新鮮臍帶，以等滲的平衡鹽溶液或無血清培養基洗去臍帶殘留血液，去除臍動脈、臍靜脈及臍帶外膜，剝離華通膠并剪切成小塊，再以等滲的平衡鹽溶液或無血清培養液沖洗后，浸泡于0.05～0.3％膠原酶溶液中，置于35～37.5℃溫箱中10～30小時，組織塊消化，液體呈粘稠狀，然后加入相當于原液1～10倍量的含胎牛血清的培養基終止消化，分裝于培養瓶或培養皿，置CO₂培養箱，待細胞貼壁后更換含胎牛血清的培養基溶液，以后每隔2～4天換液一次，細胞貼壁融合后傳代培養；傳代培養2～4代，即時使用或冷凍保存備用。?

本發明所稱“臍帶華通膠來源的間充質干細胞”在生物學表型鑒定中，具有?以下技術特征：①在標準培養條件下粘附于塑料制培養器皿生長；②表達CD90、CD105、CD44；HLA-ABC；不表達CD45、CD34，HLA-DR；③體外可誘導分化為成骨細胞和脂肪細胞。?